Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು. ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು CSS ಗೆ ಸೀಮಿತ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕೆಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಆಫ್ ಮಾಡಿ). ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಹೆಚ್ಚಿನ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು (NP ಗಳು) ವಿಭಿನ್ನ ಡೋಸೇಜ್ ರೂಪಗಳಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳನ್ನು ಕಂಡುಕೊಂಡಿವೆ. ಈ ಕೆಲಸವು ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ಚಿಟೋಸಾನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ರಚನೆಯ ಮೇಲೆ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಗುರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನ್ನು ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ. ನಾವು ಈ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳನ್ನು ಮರು ಕರಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅವುಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಮೊದಲು, ಚಿಟೋಸಾನ್/ಸೋಡಿಯಂ ಟ್ರಿಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು 318 nm ಗೆ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗಿತ್ತು, PDI 0.18 ಆಗಿತ್ತು, ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯು 99.4% ಆಗಿತ್ತು ಮತ್ತು ಲೋಡಿಂಗ್ 25.01% ಆಗಿತ್ತು. ಪುನರ್ರಚನೆಯ ನಂತರ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನ್ನು ಬಳಸದೆ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾದವುಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ, ಎಲ್ಲಾ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ತಮ್ಮ ಗೋಳಾಕಾರದ ಕಣ ರಚನೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡವು. ಸ್ಪ್ರೇ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಒಣಗಿದ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಪ್ರೇ-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಸಹ ಚಿಕ್ಕ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು (376 nm) ಮತ್ತು ಇದೇ ರೀತಿಯ ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದರದೊಂದಿಗೆ ಅತ್ಯಧಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅಂಶವನ್ನು (25.02%) ತೋರಿಸಿದವು. (98.7%) ಮತ್ತು PDI (0.20) ಒಣಗಿಸುವುದು ಅಥವಾ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸುವ ತಂತ್ರಗಳಿಂದ. ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಒಣಗಿದ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ವೇಗವಾದ ಬಿಡುಗಡೆಗೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಅತ್ಯುನ್ನತ ದಕ್ಷತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಫ್ರೀಜ್ ಒಣಗಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್‌ಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳನ್ನು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ, ಕಡಿಮೆ ಸಂಯೋಜಕ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ಮತ್ತು ನಿರ್ವಹಣಾ ವೆಚ್ಚಗಳನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಕೆಲಸವು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
1922 ರಲ್ಲಿ ಇದರ ಆವಿಷ್ಕಾರದ ನಂತರ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಔಷಧೀಯ ಸಿದ್ಧತೆಗಳು ಟೈಪ್ 1 ಮಧುಮೇಹ (T1DM) ಮತ್ತು ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹ (T1DM) ರೋಗಿಗಳ ಜೀವವನ್ನು ಉಳಿಸಿವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನಂತಹ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದಾಗಿ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಸುಲಭವಾಗಿ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಪ್ರೋಟಿಯೋಲೈಟಿಕ್ ಕಿಣ್ವಗಳಿಂದ ಒಡೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೊದಲ-ಪಾಸ್ ಪರಿಣಾಮದಿಂದ ಹೊರಹಾಕಲ್ಪಡುತ್ತದೆ. ಟೈಪ್ 1 ಮಧುಮೇಹದಿಂದ ಬಳಲುತ್ತಿರುವ ಜನರಿಗೆ ಅವರ ಜೀವನದುದ್ದಕ್ಕೂ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹದಿಂದ ಬಳಲುತ್ತಿರುವ ಅನೇಕ ರೋಗಿಗಳಿಗೆ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದುಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ದೈನಂದಿನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದುಗಳು ಈ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಿಗೆ ದೈನಂದಿನ ನೋವು ಮತ್ತು ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಯ ಗಂಭೀರ ಮೂಲವಾಗಿದ್ದು, ಮಾನಸಿಕ ಆರೋಗ್ಯದ ಮೇಲೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಮೌಖಿಕ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಆಡಳಿತದಂತಹ ಕಡಿಮೆ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಆಡಳಿತದ ಇತರ ರೂಪಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತಿದೆ5 ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ ಮಧುಮೇಹ ಹೊಂದಿರುವ ಸುಮಾರು 5 ಬಿಲಿಯನ್ ಜನರ ಜೀವನದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಪುನಃಸ್ಥಾಪಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.
ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಮೌಖಿಕ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರಯತ್ನಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸಿದೆ4,6,7. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ದೇಹದ ಸ್ಥಳಗಳಿಗೆ ಉದ್ದೇಶಿತ ವಿತರಣೆಗಾಗಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಅವನತಿಯಿಂದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳ ಬಳಕೆಯು ಹಲವಾರು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಕಣ ಅಮಾನತುಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಂದಾಗಿ. ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಒಟ್ಟುಗೂಡಿಸುವಿಕೆ ಸಂಭವಿಸಬಹುದು, ಇದು ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್‌ನ ಜೈವಿಕ ಲಭ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ8. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ (NPs) ನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ಪಾಲಿಮರ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ನ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಸಹ ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು.ಪ್ರಸ್ತುತ, ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅನಗತ್ಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ತಡೆಯುವಾಗ ಸ್ಥಿರ NP ಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಚಿನ್ನದ ಮಾನದಂಡವಾಗಿದೆ9.
ಆದಾಗ್ಯೂ, ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್‌ಗೆ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಇದು NP ಗಳ ಗೋಳಾಕಾರದ ರಚನೆಯು ಐಸ್ ಸ್ಫಟಿಕಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಒತ್ತಡದಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗುವುದನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಇದು ಲೈಯೋಫಿಲೈಸೇಶನ್ ನಂತರ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಲೋಡ್ ಅನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟಂಟ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ತೂಕ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಆಕ್ರಮಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ವಿಂಡೋವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಒಣ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಅಗತ್ಯತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಮೌಖಿಕ ಮಾತ್ರೆಗಳು ಮತ್ತು ಮೌಖಿಕ ಫಿಲ್ಮ್‌ಗಳಂತಹ ಒಣ ಪುಡಿ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ ಎಂದು ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ.
ಔಷಧೀಯ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ದ್ರವ ಹಂತಗಳಿಂದ ಒಣ ಪುಡಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯು ಪ್ರಸಿದ್ಧ ಮತ್ತು ಅಗ್ಗದ ಕೈಗಾರಿಕಾ-ಪ್ರಮಾಣದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ. ಕಣ ರಚನೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲಿನ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಹಲವಾರು ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಸರಿಯಾದ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ 12, 13 .ಇದಲ್ಲದೆ, ಮೌಖಿಕ ಆಡಳಿತಕ್ಕಾಗಿ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಇದು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ನೀರು ಬಹಳ ಬೇಗನೆ ಆವಿಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಕಣದ ಕೋರ್‌ನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಇರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ 11,14, ಶಾಖ-ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟ್ ಮಾಡಲು ಅದರ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವ ಮೊದಲು, ಲೇಪನ ವಸ್ತುವನ್ನು ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಬೇಕು 11,14. ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ಮೊದಲು ಏಕರೂಪೀಕರಣವು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸುವ ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್‌ಗಳು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದ ಕಾರಣ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ ಒಣಗಿದ NP ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.
ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಅಯಾನ್ ಜೆಲ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಸೋಡಿಯಂ ಟ್ರೈಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಮೂಲಕ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅಯಾನ್ ಜೆಲೇಷನ್ ಎನ್ನುವುದು ಕೆಲವು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಎರಡು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಯಾನಿಕ್ ಪ್ರಭೇದಗಳ ನಡುವಿನ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೂಲಕ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುವ ಒಂದು ತಯಾರಿ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಚಿಟೋಸಾನ್/ಸೋಡಿಯಂ ಟ್ರೈಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅಡ್ಡ-ಸಂಯೋಜಿತ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ, ಅವುಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು SEM ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿತು. ಅವುಗಳ ಗಾತ್ರ ವಿತರಣೆ, ಮೇಲ್ಮೈ ಚಾರ್ಜ್, PDI, ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಲೋಡಿಂಗ್ ವಿಷಯವನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಅವುಗಳ ಮರುಸಂಯೋಜನೆ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ವಿಭಿನ್ನ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಮರು ಕರಗುವ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಅವುಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ರಕ್ಷಣೆ, ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಹೋಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಮಿಶ್ರ ದ್ರಾವಣದ pH ಮತ್ತು ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತವು ಅಂತಿಮ NP ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆ (EE) ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶಗಳಾಗಿವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಅಯಾನೊಟ್ರೋಪಿಕ್ ಜೆಲೇಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ. ಮಿಶ್ರ ದ್ರಾವಣದ pH ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 1a). ಚಿತ್ರ 1a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, pH 4.0 ರಿಂದ 6.0 ಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ, ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರ (nm) ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು ಮತ್ತು EE ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು, ಆದರೆ pH 6.5 ಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಾದಾಗ, ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಹೆಚ್ಚಾಗಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿತು ಮತ್ತು EE ಬದಲಾಗದೆ ಉಳಿಯಿತು. ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ, ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರವೂ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, 2.5:1 (w/w) ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಿಟೋಸಾನ್/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿದಾಗ EE ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 1b). ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತ ತಯಾರಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು (pH 6.0, ಚಿಟೋಸಾನ್/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಅನುಪಾತ) 2.5:1) ಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕಾಗಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಈ ತಯಾರಿ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು 318 nm (ಚಿತ್ರ 1c), PDI 0.18, ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ದಕ್ಷತೆ 99.4%, ಜೀಟಾ ವಿಭವ 9.8 mv ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ 25.01% (m/m) ಗೆ ಹೊಂದುವಂತೆ ಅತ್ಯುತ್ತಮಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (TEM) ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾದ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳು ಸರಿಸುಮಾರು ಗೋಳಾಕಾರದಲ್ಲಿದ್ದವು ಮತ್ತು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಏಕರೂಪದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿದ್ದವು (ಚಿತ್ರ 1d).
ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ನಿಯತಾಂಕ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್: (ಎ) ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಸರಾಸರಿ ವ್ಯಾಸ ಮತ್ತು ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯ (ಇಇ) ಮೇಲೆ ಪಿಹೆಚ್ ಪರಿಣಾಮ (ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ 5:1 ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ); (ಬಿ) ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಸರಾಸರಿ ವ್ಯಾಸ ಮತ್ತು ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯ (ಇಇ) ಮೇಲೆ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಅನುಪಾತದ ಪ್ರಭಾವ (ಪಿಹೆಚ್ 6 ನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ); (ಸಿ) ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳ ಕಣ ಗಾತ್ರ ವಿತರಣೆ; (ಡಿ) ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ TEM ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಫ್.
ಚಿಟೋಸಾನ್ 6.5 pKa ಹೊಂದಿರುವ ದುರ್ಬಲ ಪಾಲಿಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಲೈಟ್ ಎಂಬುದು ಎಲ್ಲರಿಗೂ ತಿಳಿದಿರುವ ವಿಚಾರ. ಇದರ ಮುಖ್ಯ ಅಮೈನೋ ಗುಂಪು ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಅಯಾನುಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೋನೇಟ್ ಆಗಿರುವುದರಿಂದ ಇದು ಆಮ್ಲೀಯ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಧನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಚಾರ್ಜ್ ಆಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಇದನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಚಾರ್ಜ್ ಮಾಡಲಾದ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್‌ಗಳನ್ನು ಆವರಿಸಲು ವಾಹಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಚಿಟೋಸಾನ್ ಅನ್ನು 5.3 ರ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಬಿಂದುವಿನೊಂದಿಗೆ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಆವರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಚಿಟೋಸಾನ್ ಅನ್ನು ಲೇಪನ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸುವುದರಿಂದ, ಅದರ ಅನುಪಾತದ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ, ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಹೊರ ಪದರದ ದಪ್ಪವು ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ದೊಡ್ಡ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಚಿಟೋಸಾನ್ ಹೆಚ್ಚು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಆವರಿಸಬಹುದು. ನಮ್ಮ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತವು 2.5:1 ತಲುಪಿದಾಗ EE ಅತ್ಯಧಿಕವಾಗಿತ್ತು ಮತ್ತು ಅನುಪಾತವು ಹೆಚ್ಚುತ್ತಲೇ ಇದ್ದಾಗ EE ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಯಾಗಲಿಲ್ಲ.
ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತದ ಜೊತೆಗೆ, pH ಕೂಡ NP ಗಳ ತಯಾರಿಕೆಯಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸಿದೆ. ಗ್ಯಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು 17 ಚಿಟೋಸಾನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರದ ಮೇಲೆ pH ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದರು. pH 6.0 ತಲುಪುವವರೆಗೆ ಕಣದ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ ನಿರಂತರ ಇಳಿಕೆ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ ಮತ್ತು pH > 6.0 ನಲ್ಲಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದು ನಮ್ಮ ಅವಲೋಕನಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ pH ನೊಂದಿಗೆ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅಣುವು ಋಣಾತ್ಮಕ ಮೇಲ್ಮೈ ಚಾರ್ಜ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯುತ್ತದೆ, ಹೀಗಾಗಿ, ಚಿಟೋಸಾನ್/ಸೋಡಿಯಂ ಟ್ರಿಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್ (TPP) ಸಂಕೀರ್ಣದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಸಂವಹನಗಳಿಗೆ ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಣ್ಣ ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ EE ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಅಂಶದಿಂದಾಗಿ ಈ ವಿದ್ಯಮಾನವು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, pH ಅನ್ನು 6.5 ಗೆ ಹೊಂದಿಸಿದಾಗ, ಚಿಟೋಸಾನ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಅಮೈನೋ ಗುಂಪುಗಳು ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಟ್ ಆಗಿದ್ದವು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮಡಿಸುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಹೀಗಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ pH ಅಮೈನೋ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ಗೆ ಕಡಿಮೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕ, ದೊಡ್ಡ ಅಂತಿಮ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ EE ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ.
ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಉತ್ತಮ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣ ಮತ್ತು ಪುಡಿ ರಚನೆ ತಂತ್ರಗಳ ಆಯ್ಕೆಗೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಆದ್ಯತೆಯ ವಿಧಾನವು ಔಷಧ ಸ್ಥಿರತೆ, ಏಕರೂಪದ ಕಣದ ಆಕಾರ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಔಷಧ ಲೋಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಮೂಲ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸಬೇಕು. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಎರಡು ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಹೋಲಿಸಲು, ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1% ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಫ್ರೀಜ್ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಗಾಗಿ ವಿವಿಧ ಒಣ ಪುಡಿ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನ್ನು ಬಲ್ಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್ ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟೆಂಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಚಿತ್ರ 2a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್‌ಗಾಗಿ, ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (SEM) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ, ಅನಿಯಮಿತ ಮತ್ತು ಒರಟಾದ ಮೇಲ್ಮೈಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಹೆಚ್ಚು ರಂಧ್ರವಿರುವ ಪುಡಿ ರಚನೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ ಪುಡಿಯಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಣಗಳು ಪತ್ತೆಯಾಗಿವೆ (ಚಿತ್ರ 2e). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಯಾವುದೇ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟೆಂಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ NP ಗಳು ಕೊಳೆಯುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸಿವೆ. 1% ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್‌ಗಳಿಗೆ, ನಯವಾದ ಮೇಲ್ಮೈಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಗೋಳಾಕಾರದ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ. 2b,d,f,h).ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ ಗೋಲಾಕಾರವಾಗಿಯೇ ಉಳಿದವು ಆದರೆ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಸುಕ್ಕುಗಟ್ಟಿದವು (ಚಿತ್ರ 2c).ಗೋಳಾಕಾರದ ಮತ್ತು ಸುಕ್ಕುಗಟ್ಟಿದ ಮೇಲ್ಮೈಗಳನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಅಪ್‌ಟೇಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಚರ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಗೋಚರ ನೋಟವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಉತ್ತಮವಾದ NP ಗಳ ಪುಡಿಗಳನ್ನು ನೀಡಿತು (ಚಿತ್ರ 2f,g,h). ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಗಳ ನಡುವಿನ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದ್ದರೆ, ಕರಗುವಿಕೆ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆ ದರ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.
ವಿವಿಧ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ: (a) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರ; (b) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರ; (c) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು SEM ಚಿತ್ರ; (d) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರ; (e) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಪುಡಿಯ ಚಿತ್ರ; (f) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಚಿತ್ರ; (g) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಪುಡಿಯ ಚಿತ್ರ; (h) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಪುಡಿಯ ಚಿತ್ರ.
ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟೆಂಟ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, NP ಗಳನ್ನು ಅಸ್ಫಾಟಿಕ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಇಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಐಸ್ ಸ್ಫಟಿಕಗಳಿಂದ ಹಾನಿಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ19. ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಘನೀಕರಣ ಹಂತವಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ. ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾದ NP ಗಳನ್ನು ನೀಡಿವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, NP ಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಗೋಳಾಕಾರದ ರಚನೆಯನ್ನು ನೀಡಲು ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇನ್ನೂ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಫಿಲ್ಲರ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು20 (ಚಿತ್ರ 2d), ಇದು ಅಂತಹ ಸುತ್ತುವರಿದ NP ಗಳ ಏಕರೂಪದ ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ದೊಡ್ಡ ಕಣಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದು ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 2b,d), ಇದು ಸುತ್ತುವರಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಜೊತೆಗೆ ಕಣದ ಕೋರ್‌ನಲ್ಲಿ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುವುದರಿಂದಾಗಿರಬಹುದು. ಚಿಟೋಸಾನ್ ಪದರಕ್ಕೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ ಗೋಳಾಕಾರದ ರಚನೆಯು ಹಾಗೇ ಉಳಿಯುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಮತ್ತು ಚಿಟೋಸಾನ್ ಅನುಪಾತವನ್ನು 5:1 ರಲ್ಲಿ ಇಡಲಾಗಿದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಫಿಲ್ಲರ್ ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಕಣಗಳ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಎಂಬುದು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಸಂಗತಿ.
ಫೋರಿಯರ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫಾರ್ಮ್ ಇನ್ಫ್ರಾರೆಡ್ ಅಟೆನ್ಯೂಯೇಟೆಡ್ ಟೋಟಲ್ ರಿಫ್ಲೆಕ್ಷನ್ (FTIR-ATR) ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯು ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್, ಚಿಟೋಸಾನ್, ಚಿಟೋಸಾನ್, TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ಗಳ ಭೌತಿಕ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ನಿರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳನ್ನು FTIR-ATR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, 1641, 1543 ಮತ್ತು 1412 cm-1 ರ ಬ್ಯಾಂಡ್ ತೀವ್ರತೆಗಳನ್ನು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈ ಮಾಡಿದ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ NP ಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಡ್ರೈ ಮಾಡಿದ NP ಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3). ಹಿಂದೆ ವರದಿ ಮಾಡಿದಂತೆ, ಈ ಬಲದಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಳವು ಚಿಟೋಸಾನ್, TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನಡುವಿನ ಅಡ್ಡ-ಸಂಪರ್ಕದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಚಿಟೋಸಾನ್ ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ತನಿಖೆಯು ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ಚಿಟೋಸಾನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ FTIR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಾದಲ್ಲಿ, ಚಿಟೋಸಾನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, ಕಾರ್ಬೊನಿಲ್ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು (1641 cm-1) ಮತ್ತು ಅಮೈನ್ (1543 cm-1) ಬೆಲ್ಟ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. TPP ಯ ಟ್ರಿಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಗುಂಪುಗಳು ಅಮೋನಿಯಂ ಗುಂಪುಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ. ಚಿಟೋಸಾನ್‌ನಲ್ಲಿ, 1412 ಸೆಂ.ಮೀ-1 ನಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.
ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್, ಚಿಟೋಸಾನ್, ಚಿಟೋಸಾನ್/ಟಿಪಿಪಿ/ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ಭೌತಿಕ ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ FTIR-ATR ವರ್ಣಪಟಲ.
ಇದಲ್ಲದೆ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು SEM ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ, ಇದು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಿಂಪಡಿಸಿದಾಗ ಮತ್ತು ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸಿದಾಗ ಸುತ್ತುವರಿದ NP ಗಳು ಹಾಗೇ ಉಳಿದಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಆದರೆ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯು ಮಾತ್ರ ಸುತ್ತುವರಿದ ಕಣಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ FTIR-ATR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಲ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಚಿಟೋಸಾನ್, TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ಭೌತಿಕ ಮಿಶ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲುತ್ತವೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶವು ಚಿಟೋಸಾನ್, TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನಡುವಿನ ಅಡ್ಡ-ಕೊಂಡಿಗಳು ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ NP ಗಳಲ್ಲಿ ಇನ್ನು ಮುಂದೆ ಇರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟೆಂಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ NP ಗಳ ರಚನೆಯು ನಾಶವಾಯಿತು, ಇದನ್ನು SEM ಫಲಿತಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಕಾಣಬಹುದು (ಚಿತ್ರ 2a). ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು FTIR ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್, ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ NP ಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪುನರ್ರಚನಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ NP ಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣ. ಚರ್ಚಿಸಿ.
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣವನ್ನು ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳಾಗಿ ಮರುಸಂಸ್ಕರಣೆ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಸಂಗ್ರಹದ ನಂತರ ಪುನರ್ರಚಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಟ್ಯಾಬ್ಲೆಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಮ್‌ಗಳಂತಹ ವಿಭಿನ್ನ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಬಳಕೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ. ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು ಪುನರ್ರಚನೆಯ ನಂತರ ಸ್ವಲ್ಪ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ NP ಗಳ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ನಂತರ PDI ಮತ್ತು EE ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಬದಲಾಗಿಲ್ಲ (p > 0.05) (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಈ ಫಲಿತಾಂಶವು ಮರು ಕರಗಿದ ನಂತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಣಗಳು ಹಾಗೇ ಉಳಿದಿವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಲೋಡ್ ಅಂಶವು ಮೊದಲಿನಂತೆಯೇ ಇತ್ತು (ಕೋಷ್ಟಕ 1).
ಔಷಧ ವಿತರಣಾ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಲೋಡಿಂಗ್ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಎಲ್ಲರಿಗೂ ತಿಳಿದಿದೆ. ಕಡಿಮೆ ಲೋಡಿಂಗ್ ಹೊಂದಿರುವ NP ಗಳಿಗೆ, ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಿತಿಯನ್ನು ತಲುಪಲು ಬಹಳ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ವಸ್ತುಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಅಂತಹ ಹೆಚ್ಚಿನ NP ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಮೌಖಿಕ ಆಡಳಿತ ಮತ್ತು ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಸೂತ್ರೀಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಅನಾನುಕೂಲತೆ ಮತ್ತು ತೊಂದರೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ 22 . ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯ ಬಯೋಫಿಲ್ಮ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು 23, 24, ಇದು ಕಡಿಮೆ ಲೋಡಿಂಗ್ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ NP ಗಳ ಬಳಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ದೊಡ್ಡ ಮಾತ್ರೆಗಳು ಮತ್ತು ಮೌಖಿಕ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಲ್ಲದ ದಪ್ಪ ಬಯೋಫಿಲ್ಮ್‌ಗಳು ಉಂಟಾಗುತ್ತವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಲೋಡ್ ಹೊಂದಿರುವ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಅಪೇಕ್ಷಣೀಯವಾಗಿವೆ. ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಲೋಡ್ ಈ ಪರ್ಯಾಯ ವಿತರಣಾ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಅನೇಕ ಆಕರ್ಷಕ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳನ್ನು ಮೂರು ತಿಂಗಳ ಕಾಲ ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿತ್ತು. ಮೂರು ತಿಂಗಳ ಶೇಖರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ ಎಂದು SEM ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ (ಚಿತ್ರ 4). ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಪುನರ್ರಚಿಸಿದ ನಂತರ, ಎಲ್ಲಾ NP ಗಳು EE ಯಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ಇಳಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು ಮತ್ತು ಮೂರು ತಿಂಗಳ ಶೇಖರಣಾ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಸರಿಸುಮಾರು ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣದ (~5%) ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಿದವು (ಕೋಷ್ಟಕ 2). ಆದಾಗ್ಯೂ, ಎಲ್ಲಾ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಸರಾಸರಿ ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು. ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು 525 nm ಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು, ಆದರೆ ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು ಕ್ರಮವಾಗಿ 872 ಮತ್ತು 921 nm ಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 2).
ಮೂರು ತಿಂಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾದ ವಿವಿಧ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ: (a) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರ; (b) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ SEM ಚಿತ್ರ; (c) ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರಗಳು.
ಇದಲ್ಲದೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿಸಿ ಪುನರ್ರಚಿಸಲಾದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅವಕ್ಷೇಪಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ (ಚಿತ್ರ S2). ಇದು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ ಕಣಗಳು ಸರಿಯಾಗಿ ತೂಗಾಡದ ಕಾರಣ ಉಂಟಾಗಬಹುದು. ಮೇಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವ ತಂತ್ರವು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಫಿಲ್ಲರ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟರ್‌ಗಳಿಲ್ಲದೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ ಕಿಣ್ವಕ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯ ವಿರುದ್ಧ NP ಗಳ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲು ಪೆಪ್ಸಿನ್, ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಮತ್ತು α-ಕೈಮೊಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಧಾರಣವನ್ನು pH = 2.5 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಧಾರಣವನ್ನು ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ NP ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಮೂರು ಕಿಣ್ವಕ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳಲ್ಲಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಒಳಗೆ ತ್ವರಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನಿರ್ಮೂಲನೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 5a-c). ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಎಲಿಮಿನೇಷನ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಕಿಣ್ವಕ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಈ NP ಗಳ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ರಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳಂತೆಯೇ ಇತ್ತು (ಚಿತ್ರ 1).5a-c). ಪೆಪ್ಸಿನ್, ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಮತ್ತು α-ಕೈಮೊಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಸಹಾಯದಿಂದ, ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ 50%, 60% ಮತ್ತು 75% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕ್ರಮವಾಗಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಒಳಗೆ ರಕ್ಷಿಸಬಹುದು (ಚಿತ್ರ 5a-c). ಇನ್ಸುಲಿನ್-ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ರಕ್ತಪ್ರವಾಹಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು25. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ NP ಗಳ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರಕ್ಷಣೆ ಮತ್ತು ಬಿಡುಗಡೆ ವರ್ತನೆ: (ಎ) ಪೆಪ್ಸಿನ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ರಕ್ಷಣೆ; (ಬಿ) ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ರಕ್ಷಣೆ; (ಸಿ) α-ಕೈಮೊಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ರಕ್ಷಣೆ; (ಡಿ) pH = 2.5 ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಬಿಡುಗಡೆ ವರ್ತನೆ; (ಇ) pH = 6.6 ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಬಿಡುಗಡೆ ವರ್ತನೆ; (ಎಫ್) pH = 7.0 ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಬಿಡುಗಡೆ ವರ್ತನೆ.
ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಮತ್ತು ಪುನರ್ರಚಿಸಿದ ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಬಫರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (pH = 2.5, 6.6, 7.0) 37 °C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಮೇಲೆ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಹೊಟ್ಟೆ, ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಭಾಗದ ಸಣ್ಣ ಕರುಳಿನ pH ಪರಿಸರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸುತ್ತದೆ. ವಿಭಿನ್ನ ಪರಿಸರಗಳಲ್ಲಿ ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆ. ಜಠರಗರುಳಿನ ಪ್ರದೇಶದ ತುಣುಕು. pH = 2.5 ನಲ್ಲಿ, ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಮರು ಕರಗುವ ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು ಮೊದಲ ಒಂದು ಗಂಟೆಯೊಳಗೆ ಆರಂಭಿಕ ಬರ್ಸ್ಟ್ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು, ನಂತರ ಮುಂದಿನ 5 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ನಿಧಾನ ಬಿಡುಗಡೆ (ಚಿತ್ರ 5d). ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಈ ತ್ವರಿತ ಬಿಡುಗಡೆಯು ಕಣದ ಆಂತರಿಕ ರಚನೆಯಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿಶ್ಚಲವಾಗದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಣುಗಳ ತ್ವರಿತ ಮೇಲ್ಮೈ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿದೆ. pH = 6.5 ನಲ್ಲಿ, ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಪುನರ್ರಚಿಸಿದ ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು 6 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಸುಗಮ ಮತ್ತು ನಿಧಾನ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು, ಏಕೆಂದರೆ ಪರೀಕ್ಷಾ ದ್ರಾವಣದ pH NP ಗಳು-ತಯಾರಿಸಿದ ದ್ರಾವಣದಂತೆಯೇ ಇತ್ತು (ಚಿತ್ರ 5e). pH = 7 ನಲ್ಲಿ, NP ಗಳು ಅಸ್ಥಿರವಾಗಿದ್ದವು ಮತ್ತು ಮೊದಲ ಎರಡು ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕೊಳೆಯುತ್ತವೆ (ಚಿತ್ರ 5f). ಏಕೆಂದರೆ ಚಿಟೋಸಾನ್‌ನ ಡಿಪ್ರೋಟೋನೇಷನ್ ಹೆಚ್ಚಿನ pH ನಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ಪಾಲಿಮರ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಮತ್ತು ಲೋಡ್ ಮಾಡಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಬಿಡುಗಡೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
ಇದಲ್ಲದೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು ಇತರ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳಿಗಿಂತ ವೇಗವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಪ್ರೊಫೈಲ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು (ಚಿತ್ರ 5d–f). ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಒಣಗಿಸಿದ ಪುನರ್ರಚಿಸಲಾದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳು ಚಿಕ್ಕ ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ತೋರಿಸಿದವು. ಸಣ್ಣ ಕಣಗಳು ದೊಡ್ಡ ಮೇಲ್ಮೈ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧಿತ ಔಷಧವು ಕಣದ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಹತ್ತಿರದಲ್ಲಿದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ತ್ವರಿತ ಔಷಧ ಬಿಡುಗಡೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ26.
NP ಗಳ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಚಿತ್ರ S4 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳು 50–500 μg/ml ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ, ಇದು ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳನ್ನು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ವಿಂಡೋವನ್ನು ತಲುಪಲು ಸುರಕ್ಷಿತವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಇನ್ಸುಲಿನ್ ತನ್ನ ಶಾರೀರಿಕ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಗವೆಂದರೆ ಯಕೃತ್ತು. ಹೆಪ್ಜಿ2 ಕೋಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಹೆಪಟೊಸೈಟ್ ಅಪ್‌ಟೇಕ್ ಮಾದರಿಯಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಮಾನವ ಹೆಪಟೋಮಾ ಕೋಶ ರೇಖೆಯಾಗಿದೆ. ಇಲ್ಲಿ, ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಹೆಪ್ಜಿ2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. 25 μg/mL ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಉಚಿತ FITC ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹಲವಾರು ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ ಮತ್ತು ದೃಷ್ಟಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ, ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ FITC ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಸಮಾನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ FITC ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕ (CLSM) ವೀಕ್ಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಮ್ಯಾನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದ ಲಿಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ NP ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನಾಶಪಡಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿಲ್ಲ. ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು, ಮ್ಯಾನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಮ್ಯಾನಿಟಾಲ್ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಗಳು (ಚಿತ್ರ 6a) 4.3, 2.6, 2.4, ಮತ್ತು ಉಚಿತವಾದವುಗಳಿಗಿಂತ 4.1 ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು. ಕ್ರಮವಾಗಿ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಗುಂಪು (ಚಿತ್ರ 6b). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ ಸಣ್ಣ ಗಾತ್ರದ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ, ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ಗಿಂತ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ NP ಗಳು ಮತ್ತು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳೊಂದಿಗೆ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ HepG2 ಕೋಶಗಳ ಸೇವನೆ: (a) HepG2 ಕೋಶಗಳಿಂದ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಸೇವನೆಯ ವಿತರಣೆ. (b) ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿಯಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಗಳ ಜ್ಯಾಮಿತೀಯ ಸರಾಸರಿ (n = 3), *P < 0.05 ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ.
ಅಂತೆಯೇ, CLSM ಚಿತ್ರಗಳು ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳ (ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ) FITC ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಗಳು ಇತರ ಮಾದರಿಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಬಲವಾಗಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ (ಚಿತ್ರ 6a). ಇದಲ್ಲದೆ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ, ದ್ರಾವಣದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಪ್ರಸರಣ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಅತ್ಯಧಿಕ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದವು ಏಕೆಂದರೆ ಅವುಗಳ ಕಣಗಳ ಗಾತ್ರವು ಮರು-ವಿಸರ್ಜನೆಯ ನಂತರ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ NP ಗಳಿಗಿಂತ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ.
ಚಿಟೋಸಾನ್ (ಸರಾಸರಿ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕ 100 KDa, 75–85% ಡೀಅಸಿಟೈಲೇಟೆಡ್) ಅನ್ನು ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್‌ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ. (ಓಕ್ವಿಲ್ಲೆ, ಒಂಟಾರಿಯೊ, ಕೆನಡಾ). ಸೋಡಿಯಂ ಟ್ರೈಪೋಲಿಫಾಸ್ಫೇಟ್ (TPP) ಅನ್ನು VWR (ರಾಡ್ನರ್, ಪೆನ್ಸಿಲ್ವೇನಿಯಾ, USA) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಮರುಸಂಯೋಜಿತ ಮಾನವ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್ (ವಾಲ್ಥಮ್, MA, USA) ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಫ್ಲೋರೊಸೆಸಿನ್ ಐಸೋಥಿಯೋಸೈನೇಟ್ (FITC)-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಾನವ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಮತ್ತು 4′,6-ಡಯಾಮಿಡಿನೊ-2-ಫೀನಿಲಿಂಡೋಲ್ ಡೈಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ (DAPI) ಅನ್ನು ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್‌ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ. (ಓಕ್ವಿಲ್ಲೆ, ಒಂಟಾರಿಯೊ, ಕೆನಡಾ) ಹೆಪ್‌ಜಿ 2 ಕೋಶ ರೇಖೆಯನ್ನು ATCC (ಮನಸಾಸ್, ವರ್ಜೀನಿಯಾ, USA) ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಕಾರಕಗಳು ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಅಥವಾ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ದರ್ಜೆಯವು.
0.1% ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಡಬಲ್ ಡಿಸ್ಟಿಲ್ಡ್ ವಾಟರ್ (DD ವಾಟರ್) ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ 1 mg/ml CS ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ. ಕ್ರಮವಾಗಿ DD ನೀರು ಮತ್ತು 0.1% ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ TPP ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ 1 mg/ml ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ. ಪೂರ್ವ-ಎಮಲ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಪಾಲಿಟ್ರಾನ್ PCU-2-110 ಹೈ ಸ್ಪೀಡ್ ಹೋಮೊಜೆನೈಸರ್ (ಬ್ರಿಂಕ್‌ಮನ್ ಇಂಡಸ್ಟ್. ವೆಸ್ಟ್‌ಬರಿ, NY, USA) ನೊಂದಿಗೆ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ತಯಾರಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿರುತ್ತದೆ: ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, 2ml TPP ದ್ರಾವಣವನ್ನು 4ml ಇನ್ಸುಲಿನ್ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬೆರೆಸಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ, ಮಿಶ್ರ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೈ-ಸ್ಪೀಡ್ ಸ್ಟಿರಿಂಗ್ (10,000 rpm) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಿರಿಂಜ್ ಮೂಲಕ CS ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ ಡ್ರಾಪ್‌ವೈಸ್ ಆಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಐಸ್ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಹೈ-ಸ್ಪೀಡ್ ಸ್ಟಿರಿಂಗ್ (15,000 rpm) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಅವುಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ pH ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಯಿತು. ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಲು ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು, ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಬ್-ಟೈಪ್ ಸೋನಿಕೇಟರ್ (UP 200ST, ಹೈಲ್ಷರ್ ಅಲ್ಟ್ರಾಸಾನಿಕ್ಸ್, ಟೆಲ್ಟೋ, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿ ಐಸ್ ಬಾತ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚುವರಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸೋನಿಕೇಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಇನ್ಸುಲಿನ್ NPS ಅನ್ನು Z-ಸರಾಸರಿ ವ್ಯಾಸ, ಪಾಲಿಡಿಸ್ಪರ್ಸಿಟಿ ಸೂಚ್ಯಂಕ (PDI) ಮತ್ತು ಜೀಟಾ ಸಂಭಾವ್ಯತೆಗಾಗಿ Litezir 500 (ಆಂಟನ್ ಪಾರ್, ಗ್ರಾಜ್, ಆಸ್ಟ್ರಿಯಾ) ಬಳಸಿ ಡೈನಾಮಿಕ್ ಲೈಟ್ ಸ್ಕ್ಯಾಟರಿಂಗ್ (DLS) ಅಳತೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 25°C ನಲ್ಲಿ DD ನೀರಿನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣೆಯನ್ನು ಹಿಟಾಚಿ H7600 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (TEM) (ಹಿಟಾಚಿ, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ನಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ನಂತರ ಹಿಟಾಚಿ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಹಿಟಾಚಿ, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಎನ್‌ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆ (EE) ಮತ್ತು ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ (LC) ಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು, NP ಗಳನ್ನು 100 kDa ನ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಕಟ್-ಆಫ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪೈಪ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 500 xg ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಫಿಲ್ಟ್ರೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ ಮಾಡದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು ಅಜಿಲೆಂಟ್ 1100 ಸರಣಿ HPLC ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಅಜಿಲೆಂಟ್, ಸಾಂತಾ ಕ್ಲಾರಾ, ಕ್ಯಾಲಿಫೋರ್ನಿಯಾ, USA) ಬಳಸಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಕ್ವಾಟರ್ನರಿ ಪಂಪ್, ಆಟೋಸ್ಯಾಂಪ್ಲರ್, ಕಾಲಮ್ ಹೀಟರ್ ಮತ್ತು DAD ಡಿಟೆಕ್ಟರ್. ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನ್ನು C18 ಕಾಲಮ್ (ಜೋರ್ಬಾಕ್ಸ್, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, ಅಜಿಲೆಂಟ್, USA) ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 214 nm ನಲ್ಲಿ ಪತ್ತೆಯಾಗಿದೆ. ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವು ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ ಮತ್ತು ನೀರು, 0.1% TFA ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, 10/90 ರಿಂದ 100/0 ವರೆಗಿನ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಅನುಪಾತಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವನ್ನು 1.0 ಮಿಲಿ/ನಿಮಿಷದ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ ಪಂಪ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಕಾಲಮ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು 20 °C ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಮೀಕರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು EE ಮತ್ತು LC ಯ ಶೇಕಡಾವಾರುಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ.(1) ಮತ್ತು ಸಮೀಕರಣ(2).
ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಅನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು 2.0 ರಿಂದ 4.0 ವರೆಗಿನ ವಿವಿಧ CS/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.ತಯಾರಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಮಾಣದ CS ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು, ಆದರೆ ಇನ್ಸುಲಿನ್/TPP ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಸ್ಥಿರವಾಗಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು.ಎಲ್ಲಾ ದ್ರಾವಣಗಳನ್ನು (ಇನ್ಸುಲಿನ್, TPP ಮತ್ತು CS) ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಮಿಶ್ರಣದ pH ಅನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು 4.0 ರಿಂದ 6.5 ರ pH ​​ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು.ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳ EE ಮತ್ತು ಕಣದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ pH ಮೌಲ್ಯಗಳು ಮತ್ತು CS/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ಅನುಪಾತಗಳಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಪಾತ್ರೆಯ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಟೇಪ್‌ನಿಂದ ಬಿಗಿಗೊಳಿಸಿದ ಅಂಗಾಂಶದಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಯಿತು. ತರುವಾಯ, ಸ್ಕ್ರೂ ಮಾಡಿದ ಪಾತ್ರೆಗಳನ್ನು ಟ್ರೇ ಡ್ರೈಯರ್ ಹೊಂದಿದ ಲ್ಯಾಬ್‌ಕೊಂಕೊ ಫ್ರೀಝೋನ್ ಫ್ರೀಜ್ ಡ್ರೈಯರ್‌ನಲ್ಲಿ (ಲ್ಯಾಬ್‌ಕೊಂಕೊ, ಕಾನ್ಸಾಸ್ ಸಿಟಿ, MO, USA) ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ನಿರ್ವಾತ ಒತ್ತಡವನ್ನು -10 °C, ಮೊದಲ 2 ಗಂಟೆಗೆ 0.350 ಟಾರ್, ಮತ್ತು 24 ಗಂಟೆಗಳ ಉಳಿದ 22 ಗಂಟೆಗೆ 0 °C ಮತ್ತು 0.120 ಟಾರ್‌ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾಯಿತು.
ಬುಚಿ ಮಿನಿ ಸ್ಪ್ರೇ ಡ್ರೈಯರ್ B-290 (BÜCHI, ಫ್ಲಾವಿಲ್, ಸ್ವಿಟ್ಜರ್ಲೆಂಡ್) ಅನ್ನು ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಟೆಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿದ ಒಣಗಿಸುವ ನಿಯತಾಂಕಗಳು: ತಾಪಮಾನ 100 °C, ಫೀಡ್ ಫ್ಲೋ 3 ಲೀ/ನಿಮಿಷ, ಮತ್ತು ಅನಿಲ ಫ್ಲೋ 4 ಲೀ/ನಿಮಿಷ.
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಮೊದಲು ಮತ್ತು ನಂತರದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು FTIR-ATR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಬಳಸಿ ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ನ್ಯಾನೊಕಣಗಳು ಹಾಗೂ ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಮತ್ತು ಚಿಟೋಸಾನ್ ಅನ್ನು ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ ATR ಮಾದರಿ ಪರಿಕರವನ್ನು (ಪರ್ಕಿನ್ಎಲ್ಮರ್, ವಾಲ್ಥಮ್, ಮ್ಯಾಸಚೂಸೆಟ್ಸ್, USA) ಹೊಂದಿದ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ 100 FTIR ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ (ಪರ್ಕಿನ್ಎಲ್ಮರ್, ವಾಲ್ಥಮ್, ಮ್ಯಾಸಚೂಸೆಟ್ಸ್, USA) ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. 4000-600 cm2 ಆವರ್ತನ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ 4 cm2 ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್‌ನಲ್ಲಿ 16 ಸ್ಕ್ಯಾನ್‌ಗಳಿಂದ ಸಿಗ್ನಲ್ ಸರಾಸರಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
ಹೆಲಿಯೊಸ್ ನ್ಯಾನೊಲ್ಯಾಬ್ 650 ಫೋಕಸ್ಡ್ ಅಯಾನ್ ಬೀಮ್-ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (FIB-SEM) (FEI, ಹಿಲ್ಸ್‌ಬೊರೊ, ಒರೆಗಾನ್, USA) ಸೆರೆಹಿಡಿದ ಫ್ರೀಜ್-ಒಣಗಿದ ಮತ್ತು ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ SEM ಚಿತ್ರಗಳಿಂದ ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ. ಬಳಸಿದ ಮುಖ್ಯ ನಿಯತಾಂಕವೆಂದರೆ ವೋಲ್ಟೇಜ್ 5 keV ಮತ್ತು ಕರೆಂಟ್ 30 mA.
ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು dd ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಪುನಃ ಕರಗಿಸಲಾಯಿತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ ಅವುಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಕಣಗಳ ಗಾತ್ರ, PDI, EE ಮತ್ತು LC ಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಹೇಳಿದ ಅದೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮತ್ತೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಶೇಖರಣೆಯ ನಂತರ NP ಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅನ್‌ಹೈಡ್ರೊಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಸಹ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ ಎಲ್ಲಾ NP ಗಳನ್ನು ಮೂರು ತಿಂಗಳ ಕಾಲ ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು. ಮೂರು ತಿಂಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ, NP ಗಳನ್ನು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಕಣ ಗಾತ್ರ, PDI, EE ಮತ್ತು LC ಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.
ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರ NP ಗಳನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುವಲ್ಲಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ನ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು, 5 mL ಪುನರ್ರಚಿಸಲಾದ NP ಗಳನ್ನು 45 mL ಸಿಮ್ಯುಲೇಟೆಡ್ ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ದ್ರವ (pH 1.2, 1% ಪೆಪ್ಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ), ಕರುಳಿನ ದ್ರವ (pH 6.8, 1% ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ) ಅಥವಾ ಕೈಮೊಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ದ್ರಾವಣ (100 g/mL, ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ, pH 7.8) ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ. ಅವುಗಳನ್ನು 100 rpm ನ ಆಂದೋಲನ ವೇಗದೊಂದಿಗೆ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 500 μL ದ್ರಾವಣವನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ಸಮಯ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು HPLC ನಿರ್ಧರಿಸಿತು.
ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಮತ್ತು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಬ್ಯಾಗ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು (ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದ ಕಟ್-ಆಫ್ 100 kDa, ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಾ ಪೋರ್ ಇಂಕ್.). ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಮತ್ತು ಪುನರ್ರಚಿಸಿದ ಒಣ NP ಗಳನ್ನು ಹೊಟ್ಟೆ, ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಭಾಗದ ಸಣ್ಣ ಕರುಳಿನ pH ಪರಿಸರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸಲು pH 2.5, pH 6.6 ಮತ್ತು pH 7.0 (0.1 M ಫಾಸ್ಫೇಟ್-ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್, PBS) ನಲ್ಲಿ ದ್ರವಗಳಲ್ಲಿ ಡಯಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು 200 rpm ನಲ್ಲಿ ನಿರಂತರ ಅಲುಗಾಡುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ 37 °C ನಲ್ಲಿ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. 5 mL ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಬ್ಯಾಗ್‌ನ ಹೊರಗೆ ದ್ರವವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸಮಯಗಳಲ್ಲಿ ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ: 0.5, 1, 2, 3, 4, ಮತ್ತು 6 ಗಂಟೆಗಳು, ಮತ್ತು ತಕ್ಷಣ ತಾಜಾ ಡಯಾಲಿಸೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಮರುಪೂರಣಗೊಳಿಸಿ. ದ್ರವದಲ್ಲಿನ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು HPLC ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿತು ಮತ್ತು ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳಿಂದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಬಿಡುಗಡೆಯ ದರವನ್ನು ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸುತ್ತುವರಿದ ಒಟ್ಟು ಇನ್ಸುಲಿನ್‌ಗೆ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಉಚಿತ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಅನುಪಾತದಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು (ಸಮೀಕರಣ 3).
10% ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್, 100 IU/mL ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು 100 μg/mL ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಡಲ್ಬೆಕೊಸ್ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಈಗಲ್ಸ್ ಮೀಡಿಯಂ (DMEM) ಬಳಸಿ 60 mm ವ್ಯಾಸದ ಭಕ್ಷ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಮಾನವ ಹೆಪಟೊಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಕಾರ್ಸಿನೋಮ ಕೋಶ ಲೈನ್ ಹೆಪ್ಜಿ2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 37°C, 95% ಸಾಪೇಕ್ಷ ಆರ್ದ್ರತೆ ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು. ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗಾಗಿ, ಹೆಪ್ಜಿ2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 1 × 105 ಕೋಶಗಳು/ಮಿಲಿ ನಲ್ಲಿ 8-ಬಾವಿ ನಂಕ್ ಲ್ಯಾಬ್-ಟೆಕ್ ಚೇಂಬರ್ ಸ್ಲೈಡ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್, NY, USA) ಮೇಲೆ ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗಾಗಿ, ಅವುಗಳನ್ನು 5 × 104 ಕೋಶಗಳು/ಮಿಲಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ 96-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ (ಕಾರ್ನಿಂಗ್, NY, USA) ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಮತ್ತು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ ಇನ್ಸುಲಿನ್ NPs ನ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು30. HepG2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 96-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ 5 × 104 ಕೋಶಗಳು/mL ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಮೊದಲು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ (50 ರಿಂದ 500 μg/mL) ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ಕೋಶಗಳನ್ನು PBS ನೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚುವರಿ 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 0.5 mg/ml MTT ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಟೆಕನ್ ಅನಂತ M200 ಪ್ರೊ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಟೆಕನ್, ಮ್ಯಾನ್ನೆಡಾರ್ಫ್, ಸ್ವಿಟ್ಜರ್ಲೆಂಡ್) ಬಳಸಿ 570 nm ನಲ್ಲಿ ಹಳದಿ ಟೆಟ್ರಾಜೋಲಿಯಮ್ MTT ಯಿಂದ ನೇರಳೆ ಫಾರ್ಮಾಜಾನ್‌ಗೆ ಕಿಣ್ವಕ ಕಡಿತವನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಸೈಟೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು.
ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮತ್ತು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ NP ಗಳ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಅಪ್‌ಟೇಕ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ನಂಕ್ ಲ್ಯಾಬ್-ಟೆಕ್ ಚೇಂಬರ್ ಸ್ಲೈಡ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಬಾವಿಯನ್ನು ಉಚಿತ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್, FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 25 μg/mL ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳನ್ನು ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಪುನರ್ರಚಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಕೋಶಗಳನ್ನು PBS ನೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆದು 4% ಪ್ಯಾರಾಫಾರ್ಮಲ್ಡಿಹೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು 4′,6-ಡಯಾಮಿಡಿನೊ-2-ಫೀನೈಲಿಂಡೋಲ್ (DAPI) ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಲಾಯಿತು. ಒಲಿಂಪಸ್ FV1000 ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್/ಎರಡು-ಫೋಟಾನ್ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (ಒಲಿಂಪಸ್, ಶಿಂಜುಕು ಸಿಟಿ, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, 10 μg/mL ಉಚಿತ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್, FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ NP ಗಳು ಮತ್ತು ಮರು ಕರಗಿಸಲಾದ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ FITC-ಇನ್ಸುಲಿನ್ NP ಗಳ ಅದೇ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. HepG2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಬೀಜಗಳನ್ನು ಪಡೆದ 96-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ FBS ನಿಂದ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ 5 × 104 ಕೋಶಗಳನ್ನು BD LSR II ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೀಟರ್ (BD, ಫ್ರಾಂಕ್ಲಿನ್ ಲೇಕ್ಸ್, ನ್ಯೂಜೆರ್ಸಿ, ಯುನೈಟೆಡ್ ಸ್ಟೇಟ್ಸ್) ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು.
ಎಲ್ಲಾ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಐಬಿಎಂ ಎಸ್‌ಪಿಎಸ್‌ಎಸ್ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳು 26 ರಿಂದ ಮ್ಯಾಕ್ (ಐಬಿಎಂ, ಎಂಡಿಕಾಟ್, ನ್ಯೂಯಾರ್ಕ್, ಯುಎಸ್‌ಎ) ಏಕಮುಖ ANOVA ಅಥವಾ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು p < 0.05 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಬಲ್ಕಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋಪ್ರೊಟೆಕ್ಟೆಂಟ್‌ಗಳ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಲೋಡ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಡ್ರೈಯಿಂಗ್ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಉತ್ತಮ ಪುನರ್ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕ್ಡ್ ಚಿಟೋಸಾನ್/ಟಿಪಿಪಿ/ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲು ಸ್ಪ್ರೇ ಡ್ರೈಯಿಂಗ್‌ನ ನಮ್ಯತೆ ಮತ್ತು ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳು ಸರಾಸರಿ 318 nm ಕಣದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು 99.4% ನ ಎನ್‌ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ನೀಡಿತು. ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ನಂತರದ SEM ಮತ್ತು FTIR ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಗೋಳಾಕಾರದ ರಚನೆಯನ್ನು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಮತ್ತು ಮನ್ನಿಟಾಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ ಮಾಡಿದ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಆದರೆ ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ ಮಾಡಿದ NP ಗಳು ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕೊಳೆಯುತ್ತವೆ. ಪುನರ್ರಚನೆ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್‌ಗಳು ಚಿಕ್ಕ ಸರಾಸರಿ ಕಣ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಪುನರ್ರಚನೆಯ ಮೇಲೆ ಅತ್ಯಧಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಈ ಎಲ್ಲಾ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳ ಬಿಡುಗಡೆ ನಡವಳಿಕೆಗಳು ಅವು pH = 2.5 ಮತ್ತು pH = 7 ರ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ವೇಗವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು pH = 6.5 ರ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಬಹಳ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಇತರ ಮರು ಕರಗಿದ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಂಡ NP ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, NP ಗಳು ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ NP ಗಳ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕಾಯ್ದುಕೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ, ಮನ್ನಿಟಾಲ್ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಪ್ರೇ-ಒಣಗಿದ NP ಗಳು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದ ಫಲಿತಾಂಶಕ್ಕೆ ಈ ಫಲಿತಾಂಶವು ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ. ಮನ್ನಿಟಾಲ್-ಮುಕ್ತ ಸ್ಪ್ರೇ ಒಣಗಿಸುವಿಕೆಯಿಂದ ತಯಾರಿಸಿದ ಒಣ ಇನ್ಸುಲಿನ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್ ಮೌಖಿಕ ಮಾತ್ರೆಗಳು ಅಥವಾ ಜೈವಿಕ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಫಿಲ್ಮ್‌ಗಳಂತಹ ಇತರ ಜಲರಹಿತ ಡೋಸೇಜ್ ರೂಪಗಳಾಗಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಸಂಸ್ಕರಣೆಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತವೆಂದು ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಬೌದ್ಧಿಕ ಆಸ್ತಿ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಂದಾಗಿ, ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ರಚಿಸಲಾದ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾದ ಡೇಟಾಸೆಟ್‌ಗಳು ಸಾರ್ವಜನಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ಸಮಂಜಸವಾದ ಕೋರಿಕೆಯ ಮೇರೆಗೆ ಆಯಾ ಲೇಖಕರಿಂದ ಲಭ್ಯವಿದೆ.
ಕಗನ್, ಎ. ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹ: ಸಾಮಾಜಿಕ ಮತ್ತು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಮೂಲಗಳು, ವೈದ್ಯಕೀಯ ತೊಡಕುಗಳು ಮತ್ತು ರೋಗಿಗಳು ಮತ್ತು ಇತರರಿಗೆ ಪರಿಣಾಮಗಳು. (ಮ್ಯಾಕ್‌ಫಾರ್ಲೇನ್, 2009).
ಸಿಂಗ್, ಎಪಿ, ಗುವೋ, ವೈ., ಸಿಂಗ್, ಎ., ಕ್ಸಿ, ಡಬ್ಲ್ಯೂ. & ಜಿಯಾಂಗ್, ಪಿ. ಇನ್ಸುಲಿನ್ ಎನ್ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಷನ್ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ: ಈಗ ಮೌಖಿಕ ಆಡಳಿತ ಸಾಧ್ಯವೇ? ಜೆ. ಫಾರ್ಮಸಿ.ಬಯೋ-ಫಾರ್ಮಸಿ.ರಿಸರ್ವೋಯಿರ್.1, 74–92 (2019).
ವಾಂಗ್, ಸಿವೈ, ಅಲ್-ಸಲಾಮಿ, ಹೆಚ್. & ದಾಸ್, ಸಿಆರ್ ಮಧುಮೇಹ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಮೌಖಿಕ ಇನ್ಸುಲಿನ್-ಲೋಡೆಡ್ ಲಿಪೊಸೋಮ್ ವಿತರಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಇತ್ತೀಚಿನ ಪ್ರಗತಿಗಳು. ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ.ಜೆ. ಫಾರ್ಮಸಿ.549, 201–217 (2018).