ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಇರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಕರುಳಿನಿಂದ ಪಡೆದ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಇಂಡೋಲ್-3-ಪ್ರೊಪಿಯಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ (IPA) ಸೀರಮ್ ಮಟ್ಟಗಳು ಕಡಿಮೆ ಎಂದು ನಾವು ಈ ಹಿಂದೆ ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಬೊಜ್ಜು ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಮತ್ತು DNA ಮೀಥೈಲೋಮ್ ಅನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ, ಜೊತೆಗೆ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಯಕೃತ್ತಿನ ಸ್ಟೆಲೇಟ್ ಕೋಶಗಳ (HSCs) ಫಿನೋಟೈಪಿಕ್ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವಲ್ಲಿ IPA ಪಾತ್ರವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಟೈಪ್ 2 ಡಯಾಬಿಟಿಸ್ ಮೆಲ್ಲಿಟಸ್ (T2DM) ಇಲ್ಲದ (ವಯಸ್ಸು 46.8 ± 9.3 ವರ್ಷಗಳು; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m²) 116 ಬೊಜ್ಜು ರೋಗಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿತ್ತು, ಅವರು ಕುಯೋಪಿಯೊ ಬ್ಯಾರಿಯಾಟ್ರಿಕ್ ಸರ್ಜರಿ ಸೆಂಟರ್ (KOBS) ನಲ್ಲಿ ಬೇರಿಯಾಟ್ರಿಕ್ ಶಸ್ತ್ರಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಒಳಗಾಗಿದ್ದರು. ಪರಿಚಲನೆ ಮಾಡುವ IPA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ-ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (LC-MS) ಮೂಲಕ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು, ಒಟ್ಟು RNA ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ಲಿವರ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಇನ್ಫಿನಿಯಮ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ 450 ಬೀಡ್‌ಚಿಪ್ ಬಳಸಿ DNA ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಮಾನವ ಹೆಪಾಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಲೇಟ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು (LX-2) ಬಳಸಲಾಯಿತು.
ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿಕ್ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯ ಮಾರ್ಗಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳು ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ. ಎಕೆಟಿ ಸೆರಿನ್/ಥ್ರೆಯೋನೈನ್ ಕೈನೇಸ್ 1 (ಎಕೆಟಿ 1) ಜೀನ್ ಯಕೃತ್ತಿನ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೆತಿಲೀಕರಣ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಹೇರಳವಾಗಿರುವ ಮತ್ತು ಪ್ರಬಲವಾದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಜೀನ್ ಆಗಿತ್ತು. ಐಪಿಎ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಎಲ್‌ಎಕ್ಸ್-2 ಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ತಿಳಿದಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಮಾಡ್ಯುಲೇಟ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿತು.
ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ದತ್ತಾಂಶಗಳು ಐಪಿಎ ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಚ್‌ಎಸ್‌ಸಿ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಸ್ಥಿತಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಎಚ್‌ಎಸ್‌ಸಿ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ.
ಬೊಜ್ಜು ಮತ್ತು ಮೆಟಬಾಲಿಕ್ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್‌ನ ಹರಡುವಿಕೆಯು ಮೆಟಬಾಲಿಕಲಿ ಸಂಬಂಧಿತ ಫ್ಯಾಟಿ ಲಿವರ್ ಡಿಸೀಸ್ (MASLD) ನ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಸಂಭವದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ; ಈ ರೋಗವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ 25% ರಿಂದ 30% ರಷ್ಟು ಜನರ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ [1]. MASLD ಎಟಿಯಾಲಜಿಯ ಮುಖ್ಯ ಪರಿಣಾಮವೆಂದರೆ ಲಿವರ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್, ಇದು ಫೈಬ್ರಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ (ECM) ನ ನಿರಂತರ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ [2]. ಲಿವರ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮುಖ್ಯ ಕೋಶಗಳು ಹೆಪಾಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಲೇಟ್ ಕೋಶಗಳು (HSC ಗಳು), ಇದು ನಾಲ್ಕು ತಿಳಿದಿರುವ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ: ನಿಶ್ಚಲ, ಸಕ್ರಿಯ, ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಮತ್ತು ವೃದ್ಧ [3, 4]. HSC ಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಿಶ್ಚಲ ರೂಪದಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶಕ್ತಿಯ ಬೇಡಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಸರಣ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ತರಹದ ಕೋಶಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು, α-ಸ್ಮೂತ್ ಸ್ನಾಯು ಆಕ್ಟಿನ್ (α-SMA) ಮತ್ತು ಟೈಪ್ I ಕಾಲಜನ್ (Col-I) [5, 6] ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯೇಟ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಲಿವರ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ರಿವರ್ಸಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಸಕ್ರಿಯ HSC ಗಳನ್ನು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅಥವಾ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ಮೂಲಕ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೊಜೆನಿಕ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಡೌನ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಸರ್ವೈವಲ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಮಾಡ್ಯುಲೇಷನ್ (NF-κB ಮತ್ತು PI3K/Akt ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳು) [7, 8], ಹಾಗೆಯೇ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು [9] ಸೇರಿವೆ.
ಕರುಳಿನಲ್ಲಿ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಇಂಡೋಲ್-3-ಪ್ರೊಪಿಯಾನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ (IPA) ಸೀರಮ್ ಮಟ್ಟಗಳು MASLD [10–13] ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾನವ ಚಯಾಪಚಯ ರೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವುದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. IPA ಆಹಾರದ ಫೈಬರ್ ಸೇವನೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಅದರ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಪರಿಣಾಮಗಳಿಗೆ ಹೆಸರುವಾಸಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆಹಾರ-ಪ್ರೇರಿತ ಆಲ್ಕೊಹಾಲ್ಯುಕ್ತವಲ್ಲದ ಸ್ಟೀಟೊಹೆಪಟೈಟಿಸ್ (NASH) ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಇನ್ ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ [11–14] ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಕುಯೋಪಿಯೊ ಬ್ಯಾರಿಯಾಟ್ರಿಕ್ ಸರ್ಜರಿ ಸ್ಟಡಿ (KOBS) ನಲ್ಲಿ ಲಿವರ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಇಲ್ಲದ ಬೊಜ್ಜು ರೋಗಿಗಳಿಗಿಂತ ಲಿವರ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳು ಕಡಿಮೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನದಿಂದ ಕೆಲವು ಪುರಾವೆಗಳು ಬಂದಿವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮಾನವ ಹೆಪಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಲೇಟ್ ಸೆಲ್ (LX-2) ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ, ಜೀವಕೋಶ ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಗುರುತುಗಳಾಗಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಸಂಭಾವ್ಯ ಹೆಪಟೊಪ್ರೊಟೆಕ್ಟಿವ್ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ [15] ಎಂದು ನಾವು ತೋರಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, HSC ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಬಯೋಎನರ್ಜೆಟಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ IPA ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಹಿಂಜರಿತವನ್ನು ಹೇಗೆ ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ.
ಇಲ್ಲಿ, ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಬೊಜ್ಜು ಆದರೆ ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹ (KOBS) ಅಲ್ಲದ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳ ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯ ಮಾರ್ಗಗಳಲ್ಲಿ ಪುಷ್ಟೀಕರಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮಾರ್ಗದ ಮೂಲಕ ಸಕ್ರಿಯ ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳ (HSCs) ತೆರವು ಮತ್ತು ಅವನತಿಯನ್ನು IPA ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು IPA ಗಾಗಿ ಒಂದು ಹೊಸ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಹಿಂಜರಿತವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಗುರಿಯಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
KOBS ಸಮೂಹದಲ್ಲಿ ನಡೆದ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನವು, ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಇಲ್ಲದ ರೋಗಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಚಲನೆಯ IPA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದಾರೆಂದು ತೋರಿಸಿದೆ [15]. ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹದ ಸಂಭಾವ್ಯ ಗೊಂದಲಕಾರಿ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊರಗಿಡಲು, ನಾವು ನಡೆಯುತ್ತಿರುವ KOBS ಅಧ್ಯಯನದಿಂದ ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹವಿಲ್ಲದ 116 ಬೊಜ್ಜು ರೋಗಿಗಳನ್ನು (ಸರಾಸರಿ ವಯಸ್ಸು ± SD: 46.8 ± 9.3 ವರ್ಷಗಳು; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (ಕೋಷ್ಟಕ 1) ಅಧ್ಯಯನ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯಾಗಿ ನೇಮಿಸಿಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ [16]. ಎಲ್ಲಾ ಭಾಗವಹಿಸುವವರು ಲಿಖಿತ ಮಾಹಿತಿಯುಕ್ತ ಒಪ್ಪಿಗೆಯನ್ನು ನೀಡಿದರು ಮತ್ತು ಹೆಲ್ಸಿಂಕಿಯ ಘೋಷಣೆಯ (54/2005, 104/2008 ಮತ್ತು 27/2010) ಪ್ರಕಾರ ನಾರ್ತ್ ಸಾವೊ ಕೌಂಟಿ ಆಸ್ಪತ್ರೆಯ ನೈತಿಕ ಸಮಿತಿಯು ಅಧ್ಯಯನ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ನು ಅನುಮೋದಿಸಿದೆ.
ಬೇರಿಯಾಟ್ರಿಕ್ ಶಸ್ತ್ರಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಯಕೃತ್ತಿನ ಬಯಾಪ್ಸಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಅನುಭವಿ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ಮಾನದಂಡಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಹಿಸ್ಟೋಲಾಜಿಕಲ್ ಆಗಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಿದರು [17, 18]. ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾನದಂಡಗಳನ್ನು ಪೂರಕ ಕೋಷ್ಟಕ S1 ರಲ್ಲಿ ಸಂಕ್ಷೇಪಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ [19].
ಉಪವಾಸ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮೆಟಾಬಾಲೊಮಿಕ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಗುರಿಯಿಲ್ಲದ ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ-ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ (LC-MS) ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ (n = 116). ಮಾದರಿಗಳನ್ನು UHPLC-qTOF-MS ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು (1290 LC, 6540 qTOF-MS, ಅಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ವಾಲ್ಡ್‌ಬ್ರಾನ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ರುಹೆ, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಐಸೊಪ್ರೊಪಿಲ್ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ (IPA) ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸುವುದು ಧಾರಣ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧ ಮಾನದಂಡಗಳೊಂದಿಗೆ MS/MS ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್‌ನ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಮುಂದಿನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಲ್ಲಿ IPA ಸಿಗ್ನಲ್ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು (ಗರಿಷ್ಠ ಪ್ರದೇಶ) ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ [20].
ಇಲ್ಯುಮಿನಾ ಹೈಸೆಕ್ 2500 ಬಳಸಿ ಸಂಪೂರ್ಣ ಯಕೃತ್ತಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಡೇಟಾವನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಪೂರ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗಿದೆ [19, 21, 22]. ಮಿಟೊಮೈನರ್ 4.0 ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ನಿಂದ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾದ 1957 ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಕಾರ್ಯ/ಬಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳ ಗುರಿ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಾವು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ [23]. ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಅದೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇನ್ಫಿನಿಯಮ್ ಹ್ಯೂಮನ್‌ಮೀಥೈಲೇಷನ್ 450 ಬೀಡ್‌ಚಿಪ್ (ಇಲ್ಯುಮಿನಾ, ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ, ಸಿಎ, ಯುಎಸ್‌ಎ) ಬಳಸಿ ಯಕೃತ್ತಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೆತಿಲೀಕರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು [24, 25].
ಮಾನವ ಯಕೃತ್ತಿನ ನಕ್ಷತ್ರಾಕಾರದ ಕೋಶಗಳನ್ನು (LX-2) ಪ್ರೊಫೆಸರ್ ಸ್ಟೆಫಾನೊ ರೋಮಿಯೋ ದಯೆಯಿಂದ ಒದಗಿಸಿದರು ಮತ್ತು DMEM/F12 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (ಬಯೋವೆಸ್ಟ್, L0093-500, 1% ಪೆನ್/ಸ್ಟ್ರೆಪ್; ಲೋನ್ಜಾ, DE17-602E, 2% FBS; ಗಿಬ್ಕೊ, 10270-106) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು. IPA ಯ ಕೆಲಸದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು, LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು DMEM/F12 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಯ IPA (10 μM, 100 μM ಮತ್ತು 1 mM; ಸಿಗ್ಮಾ, 220027) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಇದಲ್ಲದೆ, HSC ಗಳನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ IPA ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು, LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 5 ng/ml TGF-β1 (R&D ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು, 240-B-002/CF) ಮತ್ತು 1 mM IPA ಯೊಂದಿಗೆ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸಹ-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಅನುಗುಣವಾದ ವಾಹನ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಿಗಾಗಿ, 0.1% BSA ಹೊಂದಿರುವ 4 nM HCL ಅನ್ನು TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಮತ್ತು 0.05% DMSO ಅನ್ನು IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಎರಡನ್ನೂ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು.
ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ 7-AAD (ಬಯೋಲೆಜೆಂಡ್, ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ, CA, USA, Cat# 640922) ಹೊಂದಿರುವ FITC ಅನೆಕ್ಸಿನ್ V ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಪತ್ತೆ ಕಿಟ್ ಬಳಸಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, LX-2 (1 × 105 ಕೋಶಗಳು/ಬಾವಿ) ಅನ್ನು 12-ಬಾವಿ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ IPA ಅಥವಾ IPA ಮತ್ತು TGF-β1 ನ ಬಹು ಪ್ರಮಾಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಮರುದಿನ, ತೇಲುವ ಮತ್ತು ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ, ಟ್ರಿಪ್ಸಿನೈಸ್ ಮಾಡಿ, PBS ನಿಂದ ತೊಳೆದು, ಅನೆಕ್ಸಿನ್ V ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಮರುಹೊಂದಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು FITC-ಅನೆಕ್ಸಿನ್ V ಮತ್ತು 7-AAD ನೊಂದಿಗೆ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಮಿಟೊಟ್ರಾಕರ್™ ರೆಡ್ CMXRos (MTR) (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬ್ಯಾಡ್, CA) ಬಳಸಿ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಾಗಿ ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾವನ್ನು ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ. MTR ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗಾಗಿ, LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು IPA ಮತ್ತು TGF-β1 ನೊಂದಿಗೆ ಸಮಾನ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಟ್ರಿಪ್ಸಿನೈಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು, PBS ನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ನಂತರ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 °C ನಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 100 μM MTR ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು [26]. ಲೈವ್ ಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಸ್ಕ್ಯಾಟರ್ (FSC) ಮತ್ತು ಸೈಡ್ ಸ್ಕ್ಯಾಟರ್ (SSC) ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು.
ಎಲ್ಲಾ ಡೇಟಾವನ್ನು (30,000 ಈವೆಂಟ್‌ಗಳು) NovoCyte Quanteon (Agilent) ಬಳಸಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು NovoExpress® 1.4.1 ಅಥವಾ FlowJo V.10 ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಸೀಹಾರ್ಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಎಫ್ ಸೆಲ್ ಮಿಟೊ ಸ್ಟ್ರೆಸ್ ಹೊಂದಿದ ಸೀಹಾರ್ಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಸಾಂತಾ ಕ್ಲಾರಾ, ಸಿಎ) ಬಳಸಿ ಆಮ್ಲಜನಕ ಬಳಕೆಯ ದರ (ಒಸಿಆರ್) ಮತ್ತು ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಆಮ್ಲೀಕರಣ ದರ (ಇಸಿಎಆರ್) ಅನ್ನು ನೈಜ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, 2 × 104 ಎಲ್‌ಎಕ್ಸ್-2 ಕೋಶಗಳು/ಬಾವಿಯನ್ನು XF96 ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಫಲಕಗಳ ಮೇಲೆ ಬೀಜ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ರಾತ್ರಿಯ ಕಾವು ನಂತರ, ಕೋಶಗಳನ್ನು ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ (ಐಪಿಎ) ಮತ್ತು ಟಿಜಿಎಫ್-β1 (ಪೂರಕ ವಿಧಾನಗಳು 1) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. ಸೀಹಾರ್ಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಎಫ್ ವೇವ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಡೇಟಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಸೀಹಾರ್ಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಎಫ್ ಸೆಲ್ ಎನರ್ಜಿ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಪರೀಕ್ಷಾ ವರದಿ ಜನರೇಟರ್ ಸೇರಿದೆ. ಇದರಿಂದ, ಬಯೋಎನರ್ಜೆಟಿಕ್ ಹೆಲ್ತ್ ಇಂಡೆಕ್ಸ್ (ಬಿಎಚ್‌ಐ) ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು [27].
ಒಟ್ಟು RNA ಅನ್ನು cDNA ಗೆ ಲಿಪ್ಯಂತರ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವಿಧಾನಗಳಿಗಾಗಿ, ಉಲ್ಲೇಖವನ್ನು ನೋಡಿ [15]. ಮಾನವ 60S ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಆಮ್ಲೀಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ P0 (RPLP0) ಮತ್ತು ಸೈಕ್ಲೋಫಿಲಿನ್ A1 (PPIA) mRNA ಮಟ್ಟಗಳನ್ನು ರಚನಾತ್ಮಕ ಜೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಕ್ವಾಂಟ್‌ಸ್ಟುಡಿಯೋ 6 ಪ್ರೊ ರಿಯಲ್-ಟೈಮ್ PCR ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್, ಲ್ಯಾಂಡ್ಸ್‌ಮೀರ್, ನೆದರ್‌ಲ್ಯಾಂಡ್ಸ್) ಅನ್ನು TaqMan™ ಫಾಸ್ಟ್ ಅಡ್ವಾನ್ಸ್ಡ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಕ್ಸ್ ಕಿಟ್ (ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಅಥವಾ ಸೆನ್ಸಿಫಾಸ್ಟ್ SYBR ಲೋ-ROX ಕಿಟ್ (ಬಯೋಲಿನ್, BIO 94050) ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಸಾಪೇಕ್ಷ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪಟ್ಟುಗಳನ್ನು ತುಲನಾತ್ಮಕ Ct ಮೌಲ್ಯ ಸೈಕ್ಲಿಂಗ್ ನಿಯತಾಂಕಗಳು (ΔΔCt) ಮತ್ತು ∆∆Ct ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ವಿವರಗಳನ್ನು ಪೂರಕ ಕೋಷ್ಟಕಗಳು S2 ಮತ್ತು S3 ನಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ [28] DNeasy ರಕ್ತ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಕಿಟ್ (Qiagen) ಬಳಸಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNA (ncDNA) ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ DNA (mtDNA) ಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. ಪೂರಕ ವಿಧಾನಗಳು 2 ರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, ಪ್ರತಿ ಗುರಿ mtDNA ಪ್ರದೇಶದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಮೂರು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ DNA ಪ್ರದೇಶಗಳ (mtDNA/ncDNA) ಜ್ಯಾಮಿತೀಯ ಸರಾಸರಿಗೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವ ಮೂಲಕ mtDNA ಯ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. mtDNA ಮತ್ತು ncDNA ಗಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ವಿವರಗಳನ್ನು ಪೂರಕ ಕೋಷ್ಟಕ S4 ರಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ.
ಅಂತರಕೋಶೀಯ ಮತ್ತು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು ಲೈವ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು Mitotracker™ Red CMXRos (MTR) (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬ್ಯಾಡ್, CA) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣ ಬಳಿಯಲಾಯಿತು. LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು (1 × 104 ಕೋಶಗಳು/ಬಾವಿ) ಗಾಜಿನ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅನುಗುಣವಾದ ಗಾಜಿನ-ತಳದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ (ಇಬಿಡಿ GmbH, ಮಾರ್ಟಿನ್‌ಸ್ರೀಡ್, ಜರ್ಮನಿ) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, ಲೈವ್ LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 37 °C ನಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 100 μM MTR ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು DAPI (1 μg/ml, ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣ ಬಳಿಯಲಾಯಿತು [29]. ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್‌ಗಳನ್ನು 63×NA 1.3 ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 5% CO2 ನೊಂದಿಗೆ ಆರ್ದ್ರಗೊಳಿಸಿದ ವಾತಾವರಣದಲ್ಲಿ 37 °C ನಲ್ಲಿ Zeiss LSM 800 ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮಾಡ್ಯೂಲ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಜ್ಜುಗೊಳಿಸಿದ Zeiss Axio Observer (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) ಬಳಸಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿ ಪ್ರಕಾರಕ್ಕೆ ನಾವು ಹತ್ತು Z-ಸರಣಿಯ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಪ್ರತಿ Z-ಸರಣಿಯು 30 ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ 9.86 μm ದಪ್ಪವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ, ZEN 2009 ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಕಾರ್ಲ್ ಝೈಸ್ ಮೈಕ್ರೋಇಮೇಜಿಂಗ್ GmbH, ಜೆನಾ, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿ ಹತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪೂರಕ ವಿಧಾನಗಳು 3 ರಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದ ನಿಯತಾಂಕಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಇಮೇಜ್‌ಜೆ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (v1.54d) [30, 31] ಬಳಸಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಕೋಶಗಳನ್ನು 0.1 M ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ 2% ಗ್ಲುಟರಾಲ್ಡಿಹೈಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ 1% ಆಸ್ಮಿಯಮ್ ಟೆಟ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ (ಸಿಗ್ಮಾ ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, MO, USA) ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಕ್ರಮೇಣ ಅಸಿಟೋನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು (ಮೆರ್ಕ್, ಡಾರ್ಮ್‌ಸ್ಟಾಡ್ಟ್, ಜರ್ಮನಿ), ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಎಪಾಕ್ಸಿ ರಾಳದಲ್ಲಿ ಹುದುಗಿಸಲಾಯಿತು. ಅಲ್ಟ್ರಾಥಿನ್ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 1% ಯುರೇನಿಲ್ ಅಸಿಟೇಟ್ (ಮೆರ್ಕ್, ಡಾರ್ಮ್‌ಸ್ಟಾಡ್ಟ್, ಜರ್ಮನಿ) ಮತ್ತು 1% ಸೀಸದ ಸಿಟ್ರೇಟ್ (ಮೆರ್ಕ್, ಡಾರ್ಮ್‌ಸ್ಟಾಡ್ಟ್, ಜರ್ಮನಿ) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣ ಬಳಿಯಲಾಯಿತು. 80 kV ವೇಗವರ್ಧಕ ವೋಲ್ಟೇಜ್‌ನಲ್ಲಿ JEM 2100F EXII ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ (JEOL ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ಅಲ್ಟ್ರಾಸ್ಟ್ರಕ್ಚರಲ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು.
24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ IPA ಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾದ LX-2 ಕೋಶಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು 50x ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಹಂತ-ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಝೈಸ್ ತಲೆಕೆಳಗಾದ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು (ಝೈಸ್ ಆಕ್ಸಿಯೋ ವರ್ಟ್.A1 ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಯೋಕ್ಯಾಮ್ MRm, ಜೆನಾ, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ ಅಥವಾ ಸರಾಸರಿ (ಇಂಟರ್ಕ್ವಾರ್ಟೈಲ್ ಶ್ರೇಣಿ: IQR) ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮೂರು ಅಧ್ಯಯನ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ನಿರಂತರ ಅಸ್ಥಿರಗಳು) ಅಥವಾ χ² ಪರೀಕ್ಷೆ (ವರ್ಗೀಕರಣ ಅಸ್ಥಿರಗಳು) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಬಹು ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ದರ (FDR) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು FDR < 0.05 ಹೊಂದಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸಿಪಿಜಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಐಪಿಎ ಸಿಗ್ನಲ್ ತೀವ್ರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧಿಸಲು ಸ್ಪಿಯರ್‌ಮ್ಯಾನ್ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ನಾಮಮಾತ್ರ ಪಿ ಮೌಲ್ಯಗಳು (ಪಿ < 0.05) ವರದಿಯಾಗಿವೆ.
268 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳು (ನಾಮಮಾತ್ರ p < 0.01), 119 ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳು (ನಾಮಮಾತ್ರ p < 0.05), ಮತ್ತು ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳನ್ನು ಪರಿಚಲನೆ ಮಾಡುವುದರೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿರುವ 3093 ಲಿವರ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ 4350 CpG ಗಳಿಗೆ ವೆಬ್-ಆಧಾರಿತ ಜೀನ್ ಸೆಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾ ಸಾಧನ (WebGestalt) ಬಳಸಿ ಮಾರ್ಗ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಉಚಿತವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ವೆನ್ನಿ DB (ಆವೃತ್ತಿ 2.1.0) ಉಪಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು StringDB (ಆವೃತ್ತಿ 11.5) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು.
LX-2 ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ, ಡಿ'ಅಗೋಸ್ಟಿನೋ-ಪಿಯರ್ಸನ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯತೆಗಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಕನಿಷ್ಠ ಮೂರು ಜೈವಿಕ ಪ್ರತಿಕೃತಿಗಳಿಂದ ಡೇಟಾವನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಬೊನ್‌ಫೆರೋನಿ ಪೋಸ್ಟ್‌ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯೊಂದಿಗೆ ಏಕಮುಖ ANOVA ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು. 0.05 ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇರುವ p-ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD ಎಂದು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ರಾಫ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಂಡೋಸ್‌ಗಾಗಿ ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸಮ್ 8 ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ (ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಇಂಕ್., ಆವೃತ್ತಿ 8.4.3, ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ, USA).
ಮೊದಲಿಗೆ, ನಾವು ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳು ಯಕೃತ್ತು, ಇಡೀ ದೇಹ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಒಟ್ಟು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ನಲ್ಲಿ, ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರಬಲ ಜೀನ್ MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; ಮೈಟೊಜೆನ್-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ 3); ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯ-ಸಂಬಂಧಿತ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ನಲ್ಲಿ, ಪ್ರಬಲವಾದ ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್ AKT1 (FDR = 0.7621; AKT ಸೆರಿನ್/ಥ್ರೆಯೋನೈನ್ ಕೈನೇಸ್ 1) (ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಫೈಲ್ 1 ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಫೈಲ್ 2).
ನಂತರ ನಾವು ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳನ್ನು (n = 268; p < 0.01) ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳನ್ನು (n = 119; p < 0.05) ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಅತ್ಯಂತ ಮಹತ್ವದ ಅಂಗೀಕೃತ ಮಾರ್ಗವೆಂದು ಗುರುತಿಸಿದ್ದೇವೆ (p = 0.0089). ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳಿಗಾಗಿ, ನಾವು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ (FDR = 0.00001), ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ (FDR = 0.00029), ಮತ್ತು TNF ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೇಲೆ (FDR = 0.000006) ಗಮನಹರಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 1A, ಕೋಷ್ಟಕ 2, ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರಗಳು 1A-B).
ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿತವಾಗಿ ಮಾನವ ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಜಾಗತಿಕ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್‌ನ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ. ಎ 268 ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು, 119 ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಮೀಥೈಲೇಟೆಡ್ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇವುಗಳನ್ನು ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ 3092 ಸಿಪಿಜಿ ಸೈಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (ಪಿ ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.01 ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೀಥೈಲೇಟೆಡ್, ಮತ್ತು ಪಿ ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು). ಪ್ರಮುಖ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳನ್ನು ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಎಕೆಟಿ 1 ಮತ್ತು ವೈಕೆಟಿ 6). ಬಿ ಇತರ ಜೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅತ್ಯಧಿಕ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆ ಸ್ಕೋರ್ (0.900) ಹೊಂದಿರುವ 13 ಜೀನ್‌ಗಳ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ಆನ್‌ಲೈನ್ ಪರಿಕರವಾದ ಸ್ಟ್ರಿಂಗ್‌ಡಿಬಿ ಬಳಸಿ ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿರುವ 56 ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳಿಂದ (ಕಪ್ಪು ರೇಖೆಯ ಪ್ರದೇಶ) ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ. ಹಸಿರು: ಜೀನ್ ಆಂಟಾಲಜಿ (ಜಿಒ) ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಘಟಕಕ್ಕೆ ಮ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಲಾದ ಜೀನ್‌ಗಳು: ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ (ಜಿಒ: 0005739). AKT1 ಎಂಬುದು ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗಿನ ಸಂವಹನಗಳಲ್ಲಿ (ಪಠ್ಯ ಗಣಿಗಾರಿಕೆ, ಪ್ರಯೋಗಗಳು, ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸಹ-ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ) ಅತ್ಯಧಿಕ ಸ್ಕೋರ್ (0.900) ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ. ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ನೋಡ್‌ಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಂಚುಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಪರ್ಕಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಗಟ್ ಮೈಕ್ರೋಬಯೋಟಾ ಮೆಟಾಬಾಲೈಟ್‌ಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಮೂಲಕ ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದಾದ್ದರಿಂದ [32], ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳು ಯಕೃತ್ತಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಸೈಟ್‌ಗಳು ಪ್ರೋಲಿನ್-ಸೆರೈನ್-ಭರಿತ ಪ್ರದೇಶ 3 (C19orf55) ಮತ್ತು ಶಾಖ ಆಘಾತ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕುಟುಂಬ ಬಿ (ಸಣ್ಣ) ಸದಸ್ಯ 6 (HSPB6) ಬಳಿ ಇವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಫೈಲ್ 3). 4350 CpG (p < 0.01) ನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯ ನಿಯಂತ್ರಕ ಮಾರ್ಗಗಳಲ್ಲಿ (p = 0.006) ಸಮೃದ್ಧವಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 1A, ಕೋಷ್ಟಕ 2, ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 1C).
ಮಾನವ ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್ ಐಪಿಎ ಮಟ್ಟಗಳು, ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು, ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳು ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧಗಳ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಜೈವಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಹಿಂದಿನ ಮಾರ್ಗ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಗುರುತಿಸಲಾದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಕ್ರಮಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 1A). 56 ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳ (ಚಿತ್ರ 1A ನಲ್ಲಿನ ಕಪ್ಪು ರೇಖೆಯ ಒಳಗೆ) ಮಾರ್ಗ ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮಾರ್ಗವು (p = 0.00029) ಮೂರು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಎರಡು ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ: ವೆನ್ ರೇಖಾಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 2 ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ 1A) ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ AKT1 ಮತ್ತು YKT6 (YKT6 v-SNARE ಹೋಮೋಲೋಗ್). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, AKT1 (cg19831386) ಮತ್ತು YKT6 (cg24161647) ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ (ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಫೈಲ್ 3). ಜೀನ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು, ನಾವು ಇನ್‌ಪುಟ್‌ನಂತೆ 56 ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ (0.900) 13 ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಿದ್ದೇವೆ. ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಮಟ್ಟದ (ಕನಿಷ್ಠ ವಿಶ್ವಾಸ) ಪ್ರಕಾರ, ಅತ್ಯಧಿಕ ಅಂಕಗಳನ್ನು (0.900) ಹೊಂದಿರುವ AKT1 ಜೀನ್ ಮೇಲ್ಭಾಗದಲ್ಲಿತ್ತು (ಚಿತ್ರ 1B).
ಮಾರ್ಗ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಪ್ರಮುಖ ಮಾರ್ಗ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು HSC ಗಳ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. IPA ಯ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರಮಾಣಗಳು (10 μM, 100 μM, ಮತ್ತು 1 mM) LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲ ಎಂದು ನಾವು ಈ ಹಿಂದೆ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದ್ದೇವೆ [15]. 10 μM ಮತ್ತು 100 μM ನಲ್ಲಿ IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯ ಮತ್ತು ನೆಕ್ರೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ ಎಂದು ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಜೀವಕೋಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯು 1 mM IPA ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು, ಆದರೆ ಜೀವಕೋಶದ ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್ ದರವು ಬದಲಾಗದೆ ಉಳಿಯಿತು (ಚಿತ್ರ 2A, B). ಮುಂದೆ, LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು, ನಾವು 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 10 μM, 100 μM ಮತ್ತು 1 mM IPA ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 2A-E ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 3A-B). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, IPA 10 μM ಮತ್ತು 100 μM ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ದರವನ್ನು (%) ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದಾಗ್ಯೂ, IPA 1 mM ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತಡವಾದ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ದರವನ್ನು (%) ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರಗಳು 2A–D).
ಐಪಿಎ ಎಲ್ಎಕ್ಸ್-2 ಕೋಶಗಳ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ. ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ ಮತ್ತು 7-ಎಎಡಿ ಡಬಲ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ ಮೂಲಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ದರ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಬಿಎ ಕೋಶಗಳನ್ನು 10 μM, 100 μM ಮತ್ತು 1 ಎಂಎಂ ಐಪಿಎಯೊಂದಿಗೆ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಅಥವಾ ಎಫ್–ಎಚ್ ಟಿಜಿಎಫ್-β1 (5 ಎನ್ಜಿ/ಮಿಲಿ) ಮತ್ತು 1 ಎಂಎಂ ಐಪಿಎಯೊಂದಿಗೆ ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಎ: ಜೀವಂತ ಕೋಶಗಳು (ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ -/ 7ಎಎಡಿ-); ಬಿ: ನೆಕ್ರೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳು (ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ -/ 7ಎಎಡಿ+); ಸಿ, ಎಫ್: ಆರಂಭಿಕ (ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ +/ 7ಎಎಡಿ-); ಡಿ, ಜಿ: ತಡವಾಗಿ (ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ವಿ+/7ಎಎಡಿ.+); ಇ, ಎಚ್: ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ದರದಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಆರಂಭಿಕ ಮತ್ತು ತಡವಾಗಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳ ಶೇಕಡಾವಾರು (%). ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಎಸ್‌ಡಿ, ಎನ್ = 3 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬೊನ್‌ಫೆರೋನಿ ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯೊಂದಿಗೆ ಏಕಮುಖ ANOVA ಬಳಸಿ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. *ಪು < 0.05; ****ಪು < 0.0001
ನಾವು ಈ ಹಿಂದೆ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, 5 ng/ml TGF-β1 ಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಮಾರ್ಕರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ [15]. LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು 5 ng/ml TGF-β1 ಮತ್ತು 1 mM IPA ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 2E–H). TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ದರವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲಿಲ್ಲ, ಆದಾಗ್ಯೂ, TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ IPA ಸಹ-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ತಡವಾದ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ದರವನ್ನು (%) ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 2E–H). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TGF-β1 ಪ್ರಚೋದನೆಯಿಂದ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ 1 mM IPA ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟದ ಮೇಲೆ IPA ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಾವು ಮತ್ತಷ್ಟು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. 1 mM IPA ಆಮ್ಲಜನಕ ಬಳಕೆಯ ದರ (OCR) ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದೆ ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ: ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅಲ್ಲದ ಉಸಿರಾಟ, ಮೂಲ ಮತ್ತು ಗರಿಷ್ಠ ಉಸಿರಾಟ, ಪ್ರೋಟಾನ್ ಸೋರಿಕೆ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ATP ಉತ್ಪಾದನೆ (ಚಿತ್ರ 3A, B), ಆದರೆ ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿ ಆರೋಗ್ಯ ಸೂಚ್ಯಂಕ (BHI) ಬದಲಾಗಲಿಲ್ಲ.
LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ IPA ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟದ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು (OCR) ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟದ ನಿಯತಾಂಕಗಳಾಗಿ (ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅಲ್ಲದ ಉಸಿರಾಟ, ಮೂಲ ಉಸಿರಾಟ, ಗರಿಷ್ಠ ಉಸಿರಾಟ, ಪ್ರೋಟಾನ್ ಸೋರಿಕೆ, ATP ಉತ್ಪಾದನೆ, SRC ಮತ್ತು BHI) ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. A ಮತ್ತು B ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 10 μM, 100 μM ಮತ್ತು 1 mM IPA ಯೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. C ಮತ್ತು D ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ TGF-β1 (5 ng/ml) ಮತ್ತು 1 mM IPA ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಅಳತೆಗಳನ್ನು CyQuant ಕಿಟ್ ಬಳಸಿ DNA ವಿಷಯಕ್ಕೆ ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. BHI: ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿವರ್ಧಕ ಆರೋಗ್ಯ ಸೂಚ್ಯಂಕ; SRC: ಉಸಿರಾಟದ ಮೀಸಲು ಸಾಮರ್ಥ್ಯ; OCR: ಆಮ್ಲಜನಕ ಬಳಕೆಯ ದರ. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ (SD), n = 5 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಏಕಮುಖ ANOVA ಮತ್ತು Bonferroni ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. *p < 0.05; **p < 0.01; ಮತ್ತು ***p < 0.001
TGF-β1-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ LX-2 ಕೋಶಗಳ ಜೈವಿಕ-ಶಕ್ತಿ ಪ್ರೊಫೈಲ್ ಮೇಲೆ IPA ಯ ಪರಿಣಾಮದ ಬಗ್ಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಮಗ್ರ ತಿಳುವಳಿಕೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ನಾವು OCR ಮೂಲಕ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 3C,D). ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಗರಿಷ್ಠ ಉಸಿರಾಟ, ಉಸಿರಾಟದ ಮೀಸಲು ಸಾಮರ್ಥ್ಯ (SRC) ಮತ್ತು BHI ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ (ಚಿತ್ರ 3C,D). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಬೇಸಲ್ ಉಸಿರಾಟ, ಪ್ರೋಟಾನ್ ಸೋರಿಕೆ ಮತ್ತು ATP ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ SRC ಮತ್ತು BHI TGF-β1 (ಚಿತ್ರ 3C,D) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದವರಿಗಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.
ಸೀಹಾರ್ಸ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಒದಗಿಸಿದ “ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಎನರ್ಜಿ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಪರೀಕ್ಷೆ”ಯನ್ನು ಸಹ ನಾವು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 4A–D). ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 3B ಯಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ OCR ಮತ್ತು ECAR ಚಯಾಪಚಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯಗಳು ಕಡಿಮೆಯಾದವು, ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು IPA ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ OCR ನ ಮೂಲ ಮತ್ತು ಒತ್ತಡದ ಮಟ್ಟಗಳು ಕಡಿಮೆಯಾದವು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 4C). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಸಂಯೋಜನೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು, ಅಲ್ಲಿ TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ECAR ನ ಮೂಲ ಮತ್ತು ಒತ್ತಡದ ಮಟ್ಟಗಳಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 4C). HSC ಗಳಲ್ಲಿ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿನ ಕಡಿತ ಮತ್ತು TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡ ನಂತರ SCR ಮತ್ತು BHI ಅನ್ನು ಪುನಃಸ್ಥಾಪಿಸಲು ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಚಯಾಪಚಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು (OCR ಮತ್ತು ECAR) ಬದಲಾಯಿಸಲಿಲ್ಲ. ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು HSC ಗಳಲ್ಲಿ IPA ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು IPA ಕಡಿಮೆ ಶಕ್ತಿಯುತ ಪ್ರೊಫೈಲ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು HSC ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ಕಡೆಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 4D).
ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಮೇಲೆ IPA ಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಸಂಪರ್ಕಗಳ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ ಹಾಗೂ MTR ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 4 ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 5). ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸರಾಸರಿ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣ, ಶಾಖೆ ಸಂಖ್ಯೆ, ಒಟ್ಟು ಶಾಖೆಯ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಶಾಖೆಯ ಜಂಕ್ಷನ್ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು (ಚಿತ್ರ 4A ಮತ್ತು B) ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗೋಳಾಕಾರದಿಂದ ಮಧ್ಯಂತರ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 4C). IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮಾತ್ರ ಸರಾಸರಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗೋಳಾಕಾರದಿಂದ ಮಧ್ಯಂತರ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 4A). ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಪೊರೆಯ ಸಂಭಾವ್ಯ-ಅವಲಂಬಿತ MTR (ಚಿತ್ರ 4A ಮತ್ತು E) ನಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾದ ಗೋಳಾಕಾರದ, ಸರಾಸರಿ ಶಾಖೆಯ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಬದಲಾಗದೆ ಉಳಿದಿತ್ತು ಮತ್ತು ಈ ನಿಯತಾಂಕಗಳು ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವೆ ಭಿನ್ನವಾಗಿರಲಿಲ್ಲ. ಒಟ್ಟಿಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TGF-β1 ಮತ್ತು IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಜೀವಂತ LX-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಆಕಾರ ಮತ್ತು ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
LX-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ DNA ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು IPA ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ. A. ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ TGF-β1 (5 ng/ml) ಮತ್ತು 1 mM IPA ಯೊಂದಿಗೆ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾದ ಲೈವ್ LX-2 ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಚಿತ್ರಗಳು, ಮೈಟೊಟ್ರಾಕರ್™ ಕೆಂಪು CMXRos ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್‌ಗಳು ಮತ್ತು DAPI ನೊಂದಿಗೆ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. ಎಲ್ಲಾ ಡೇಟಾವು ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ ಕನಿಷ್ಠ 15 ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿ ಪ್ರಕಾರಕ್ಕೆ ನಾವು 10 Z-ಸ್ಟ್ಯಾಕ್ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಪ್ರತಿ Z-ಅಕ್ಷದ ಅನುಕ್ರಮವು 9.86 μm ದಪ್ಪವಿರುವ 30 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್: 10 μm. B. ಚಿತ್ರಕ್ಕೆ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಮಿತಿಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಗುರುತಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ವಸ್ತುಗಳು (ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ ಮಾತ್ರ). ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಜಾಲ ಸಂಪರ್ಕಗಳ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. C. ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಆಕಾರ ಅನುಪಾತಗಳ ಆವರ್ತನ. 0 ಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರವಿರುವ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಗೋಳಾಕಾರದ ಆಕಾರಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು 1 ಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರವಿರುವ ಮೌಲ್ಯಗಳು ತಂತು ಆಕಾರಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. D ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ DNA (mtDNA) ಅಂಶವನ್ನು ಮೆಟೀರಿಯಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮೆಥಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ. E ಮೈಟೊಟ್ರಾಕರ್™ ರೆಡ್ CMXRos ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮೆಟೀರಿಯಲ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮೆಥಡ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ (30,000 ಘಟನೆಗಳು) ಮೂಲಕ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD, n = 3 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಒನ್-ವೇ ANOVA ಮತ್ತು ಬಾನ್‌ಫೆರೋನಿ ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ನಂತರ ನಾವು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ LX-2 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ mtDNA ಅಂಶವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ mtDNA ಅಂಶ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 4D). TGF-β1-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ mtDNA ಅಂಶ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 4D), ಇದು IPA mtDNA ಅಂಶವನ್ನು ಮತ್ತು ಬಹುಶಃ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹಾಗೂ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 3C). ಇದಲ್ಲದೆ, IPA ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ mtDNA ಅಂಶವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದಂತೆ ತೋರುತ್ತಿತ್ತು ಆದರೆ MTR-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 4A–C).
LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ mRNA ಮಟ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ IPA ಯ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 5A–D). ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪು ಕಾಲಜನ್ ಪ್ರಕಾರ I α2 ಸರಪಳಿ (COL1A2), α-ನಯವಾದ ಸ್ನಾಯು ಆಕ್ಟಿನ್ (αSMA), ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಮೆಟಾಲೋಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ 2 (MMP2), ಮೆಟಾಲೋಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ 1 ರ ಅಂಗಾಂಶ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ (TIMP1), ಮತ್ತು ಡೈನಮಿನ್ 1-ತರಹದ ಜೀನ್ (DRP1) ನಂತಹ ಜೀನ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿದ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಪ್ರೆಗ್ನೇನ್ X ಗ್ರಾಹಕ (PXR), ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ 8 (CASP8), MAPKAPK3, B-ಕೋಶ α ನ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ κ ಜೀನ್ ಲೈಟ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ (NFκB1A) ನ ವರ್ಧಕ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ κB ಕೈನೇಸ್ ಉಪಘಟಕ β (IKBKB) ನ ಪ್ರತಿಬಂಧಕದ mRNA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು (ಚಿತ್ರ 5A–D). TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1 ಮತ್ತು IPA ಜೊತೆಗಿನ ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು COL1A2 ಮತ್ತು MMP2 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ PXR, TIMP1, B-ಕೋಶ ಲಿಂಫೋಮಾ-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, ಮತ್ತು IKBKB ಗಳ mRNA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು MMP2, Bcl-2-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ X (BAX), AKT1, ಆಪ್ಟಿಕ್ ಅಟ್ರೋಫಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ 1 (OPA1), ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ 2 (MFN2) ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ CASP8, NFκB1A, NFκB1B, ಮತ್ತು IKBKB ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಯಿತು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-3 (CASP3), ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಪೆಪ್ಟಿಡೇಸ್ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಅಂಶ 1 (APAF1), ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ 1 (MFN1), ಮತ್ತು ವಿದಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ 1 (FIS1) ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ. ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಐಪಿಎ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಐಪಿಎ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಎಲ್‌ಎಕ್ಸ್-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಡೇಟಾ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ; ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಇದು ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ಕಡೆಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ.
LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್, ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್, ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು IPA ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ TGF-β1 ಮತ್ತು IPA ನೊಂದಿಗೆ LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಿದ ನಂತರ ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್‌ಗಳು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ (RPLP0 ಅಥವಾ PPIA) ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ mRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ. A ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, B ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, C ಬದುಕುಳಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು D ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನ (SD), n = 3 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಏಕಮುಖ ANOVA ಮತ್ತು Bonferroni ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ನಂತರ, ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ (FSC-H) ಮತ್ತು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ (SSC-H) ನಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ (ಚಿತ್ರ 6A,B) ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (TEM) ಮತ್ತು ಫೇಸ್ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6A-B) ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ನಿರೀಕ್ಷೆಯಂತೆ, TGF-β1-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಜೀವಕೋಶಗಳು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾದವು (ಚಿತ್ರ 6A,B), ಒರಟಾದ ಎಂಡೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ರೆಟಿಕ್ಯುಲಮ್ (ER*) ಮತ್ತು ಫಾಗೊಲಿಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ (P) ಕ್ಲಾಸಿಕ್ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶ (HSC) ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6A). ಆದಾಗ್ಯೂ, TGF-β1-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, TGF-β1 ಮತ್ತು IPA ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ, ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ (ಚಿತ್ರ 6A,B), ಮತ್ತು ER* ಅಂಶವು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6A). ಇದಲ್ಲದೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ, ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ (ಚಿತ್ರ 6A,B), P ಮತ್ತು ER* ಅಂಶವನ್ನು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6A) ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 24 ಗಂಟೆಗಳ IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳ ಅಂಶವು ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಬಿಳಿ ಬಾಣಗಳು, ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6B). ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 1 mM IPA HSC ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು TGF-β1 ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ನಿಯತಾಂಕಗಳಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಹಿಮ್ಮುಖಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ HSC ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿರಬಹುದಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ IPA ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ. ಹರಿವಿನ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು. ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಗೇಟಿಂಗ್ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿದೆ: ಜೀವಕೋಶದ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲು SSC-A/FSC-A, ಡಬಲ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು FSC-H/FSC-A, ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ SSC-H/FSC-H. ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು TGF-β1 (5 ng/ml) ಮತ್ತು 1 mM IPA ಯೊಂದಿಗೆ ಸೀರಮ್-ಮುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಎಡ ಕ್ವಾಡ್ರಾಂಟ್ (SSC-H-/FSC-H-), ಮೇಲಿನ ಎಡ ಕ್ವಾಡ್ರಾಂಟ್ (SSC-H+/FSC-H-), ಕೆಳಗಿನ ಬಲ ಕ್ವಾಡ್ರಾಂಟ್ (SSC-H-/FSC-H+), ಮತ್ತು ಮೇಲಿನ ಬಲ ಕ್ವಾಡ್ರಾಂಟ್ (SSC-H+/FSC-H+) ಆಗಿ ವಿತರಿಸಲಾಯಿತು. B. FSC-H (ಮುಂದಕ್ಕೆ ಸ್ಕ್ಯಾಟರ್, ಕೋಶ ಗಾತ್ರ) ಮತ್ತು SSC-H (ಸೈಡ್ ಸ್ಕ್ಯಾಟರ್, ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸ್ಮಿಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ) (30,000 ಘಟನೆಗಳು) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿಯ ಮೂಲಕ ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಡೇಟಾವನ್ನು ಸರಾಸರಿ ± SD, n = 3 ಸ್ವತಂತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಗಳಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಏಕಮುಖ ANOVA ಮತ್ತು ಬೋನ್‌ಫೆರೋನಿ ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001 ಮತ್ತು ****p < 0.0001
IPA ನಂತಹ ಕರುಳಿನ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಸಂಶೋಧನೆಯ ಬಿಸಿ ವಿಷಯವಾಗಿದೆ, ಇದು ಕರುಳಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯಲ್ಲಿ ಹೊಸ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ ಮಾನವರಲ್ಲಿ ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ಗೆ ನಾವು ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಿರುವ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಆಗಿರುವ IPA, ಪ್ರಾಣಿ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಫೈಬ್ರೊಟಿಕ್ ವಿರೋಧಿ ಸಂಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದು ಆಸಕ್ತಿದಾಯಕವಾಗಿದೆ [15]. ಇಲ್ಲಿ, ಟೈಪ್ 2 ಮಧುಮೇಹ (T2D) ಇಲ್ಲದ ಬೊಜ್ಜು ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೀರಮ್ IPA ಮತ್ತು ಜಾಗತಿಕ ಯಕೃತ್ತಿನ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು DNA ಮೀಥೈಲೇಷನ್ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನಾವು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ, ಇದು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯವನ್ನು ಹಾಗೂ ಯಕೃತ್ತಿನ ಹೋಮಿಯೋಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಜೀನ್ AKT1 ಅನ್ನು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನದ ಮತ್ತೊಂದು ನವೀನತೆಯೆಂದರೆ, LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಬಯೋಎನರ್ಜೆಟಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಾವು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು HSC ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ಕಡೆಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಕಡಿಮೆ ಶಕ್ತಿಯ ವರ್ಣಪಟಲವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು IPA ಅನ್ನು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಭ್ಯರ್ಥಿಯನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಸೀರಮ್ IPA ಪರಿಚಲನೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಯಕೃತ್ತಿನ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯವು ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಮುಖವಾದ ಅಂಗೀಕೃತ ಮಾರ್ಗಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ (MQC) ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅಡ್ಡಿಯು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆ, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ MASLD ಸಂಭವಿಸುವುದನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ [33, 34]. ಆದ್ದರಿಂದ, ಯಕೃತ್ತಿನಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾಯುಷ್ಯದ ಮೂಲಕ ಜೀವಕೋಶದ ಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ IPA ಭಾಗಿಯಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸಬಹುದು. YKT6 ಮತ್ತು AKT1 ಎಂಬ ಮೂರು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಎರಡು ಜೀನ್‌ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿವೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸಿದೆ. YKT6 ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ SNARE ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎಂಬುದು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಸಂಗತಿ. ಇದು ಆಟೋಫಾಗೋಸೋಮ್‌ನಲ್ಲಿ STX17 ಮತ್ತು SNAP29 ನೊಂದಿಗೆ ಇನಿಶಿಯೇಷನ್ ​​ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಮೂಲಕ ಆಟೋಫ್ಯಾಜಿ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿಯಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಆಟೋಫಾಗೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಲೈಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ [35]. ಇದಲ್ಲದೆ, YKT6 ಕಾರ್ಯದ ನಷ್ಟವು ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ [36], ಆದರೆ YKT6 ನ ಅಪ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್ ಹೆಪಟೊಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಕಾರ್ಸಿನೋಮ (HCC) ಯ ಪ್ರಗತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿದ ಜೀವಕೋಶದ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ [37]. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, AKT1 ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಮುಖವಾದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯ ಜೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, PI3K/AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗ, ಕೋಶ ಚಕ್ರ, ಕೋಶ ವಲಸೆ, ಪ್ರಸರಣ, ಫೋಕಲ್ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಕಾಲಜನ್ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆ [38–40] ಸೇರಿದಂತೆ ಯಕೃತ್ತಿನ ಕಾಯಿಲೆಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಸಕ್ರಿಯಗೊಂಡ PI3K/AKT ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗವು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳನ್ನು (HSCs) ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಇವು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ (ECM) ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಕಾರಣವಾದ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಅನಿಯಂತ್ರಣವು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ [40] ಸಂಭವಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಗತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, AKT p53-ಅವಲಂಬಿತ ಜೀವಕೋಶ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಜೀವಕೋಶ ಬದುಕುಳಿಯುವ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು AKT ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಯಕೃತ್ತಿನ ಜೀವಕೋಶ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ [41, 42] ನ ಪ್ರತಿಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿರಬಹುದು. ಪಡೆದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಐಪಿಎ ಯಕೃತ್ತಿನ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾ-ಸಂಬಂಧಿತ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಭಾಗಿಯಾಗಿರಬಹುದು, ಇದು ಹೆಪಟೊಸೈಟ್‌ಗಳ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ನಡುವಿನ ನಿರ್ಧಾರದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಎಕೆಟಿ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ವೈಕೆಟಿ6 ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಜೀನ್‌ಗಳು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು, ಇದು ಯಕೃತ್ತಿನ ಹೋಮಿಯೋಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.
ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 1 mM IPA ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು ಮತ್ತು TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಿಂದ ಸ್ವತಂತ್ರವಾಗಿ LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮತ್ತು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ (HSC) ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನ ಹಿಮ್ಮುಖ ಶಾರೀರಿಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಘಟನೆಯಾಗಿದೆ ಎಂಬುದು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿದೆ [4, 43]. ಇದಲ್ಲದೆ, ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ BHI ಮರುಸ್ಥಾಪನೆಯು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ IPA ಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪಾತ್ರದ ಬಗ್ಗೆ ಹೊಸ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಿತು. ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಮತ್ತು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ATP ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಗ್ಲೈಕೋಲಿಟಿಕ್ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುವ ಶಕ್ತಿಯ ಬೇಡಿಕೆಗಳನ್ನು ಸರಿದೂಗಿಸಲು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ [44]. IPA ಚಯಾಪಚಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು ECAR ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ ಎಂಬ ಅಂಶವು ಗ್ಲೈಕೋಲಿಟಿಕ್ ಮಾರ್ಗವು ಕಡಿಮೆ ಆದ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಅದೇ ರೀತಿ, ಮತ್ತೊಂದು ಅಧ್ಯಯನವು 1 mM IPA ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳು, ಮಾನವ ಹೆಪಟೊಸೈಟ್ ಕೋಶ ರೇಖೆ (Huh7) ಮತ್ತು ಮಾನವ ಹೊಕ್ಕುಳಿನ ಅಭಿಧಮನಿ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (HUVEC) ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟದ ಸರಪಳಿ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ; ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಗ್ಲೈಕೋಲಿಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ IPA ಯ ಯಾವುದೇ ಪರಿಣಾಮ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ, ಇದು IPA ಇತರ ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ [45]. ಆದ್ದರಿಂದ, 1 mM IPA ಸೌಮ್ಯವಾದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಅನ್‌ಕಪ್ಲರ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸುತ್ತೇವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು mtDNA ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸದೆ ಫೈಬ್ರೊಜೆನಿಕ್ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ, ಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಜೈವಿಕ ಶಕ್ತಿಗಳನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ [46]. ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅನ್‌ಕಪ್ಲರ್‌ಗಳು ಸಂಸ್ಕೃತಿ-ಪ್ರೇರಿತ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು [47] ಮತ್ತು ಅನ್‌ಕಪ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (UCP) ಅಥವಾ ಅಡೆನಿನ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಲೋಕೇಸ್ (ANT) ನಂತಹ ಕೆಲವು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುವ ಅಥವಾ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ATP ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು. ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಈ ವಿದ್ಯಮಾನವು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ [46]. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅನ್‌ಕಪ್ಲರ್ ಆಗಿ IPA ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.
ನಂತರ ನಾವು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಉಸಿರಾಟದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಜೀವಂತ LX-2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದೆವು. ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಗೋಳಾಕಾರದಿಂದ ಮಧ್ಯಂತರಕ್ಕೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಕವಲೊಡೆಯುವಿಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ವಿದಳನದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾದ DRP1 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ [48]. ಇದಲ್ಲದೆ, ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ವಿದಳನವು ಒಟ್ಟಾರೆ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಮತ್ತು ಸಮ್ಮಿಳನದಿಂದ ವಿದಳನಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತನೆಯು ಹೆಮಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ (HSC) ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ವಿದಳನದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು HSC ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ [49]. ಹೀಗಾಗಿ, ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TGF-β1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕಡಿಮೆಯಾದ ಕವಲೊಡೆಯುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಕ್ರಿಯ ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್‌ಗಳಿಗೆ (HSCs) ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ವಿದಳನದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ನಮ್ಮ ಡೇಟಾವು IPA ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗೋಳಾಕಾರದಿಂದ ಮಧ್ಯಂತರ ಆಕಾರಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ OPA1 ಮತ್ತು MFN2 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. OPA1 ನ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಪೊರೆಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು [50] ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ. MFN2 ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಸಮ್ಮಿಳನ ಮತ್ತು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ [51]. ಪಡೆದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TGF-β1 ಮತ್ತು/ಅಥವಾ IPA ಯಿಂದ LX-2 ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಆಕಾರ ಮತ್ತು ಗಾತ್ರವನ್ನು ಹಾಗೂ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸ್ಥಿತಿ ಮತ್ತು ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TGFβ-1 ಮತ್ತು IPA ಗಳ ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್-ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ mRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ mtDNA ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, IPA AKT1 ನ mRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಮತ್ತು COL1A2 ಮತ್ತು MMP2 ನಂತಹ ಪ್ರಮುಖ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ CASP8 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. IPA ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, BAX ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು ಮತ್ತು TIMP1 ಕುಟುಂಬದ ಉಪಘಟಕಗಳಾದ BCL-2 ಮತ್ತು NF-κB ಯ mRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು IPA ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವ ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (HSC ಗಳು) ಬದುಕುಳಿಯುವ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಅಣುಗಳು ಸಕ್ರಿಯ ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಬದುಕುಳಿಯುವ ಪರ ಸಂಕೇತಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು, ಇದು ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ವಿರೋಧಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ (Bcl-2 ನಂತಹ), ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಪರ BAX ನ ಕಡಿಮೆ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು TIMP ಮತ್ತು NF-κB ನಡುವಿನ ಸಂಕೀರ್ಣ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿರಬಹುದು [5, 7]. PXR ಮೂಲಕ IPA ತನ್ನ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು TGF-β1 ಮತ್ತು IPA ಜೊತೆಗಿನ ಸಂಯೋಜಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು PXR mRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಇದು HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ನಿಗ್ರಹವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಸಕ್ರಿಯ PXR ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಎರಡರಲ್ಲೂ HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ [52, 53]. ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಚಯಾಪಚಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಬದುಕುಳಿಯುವ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ IPA ಸಕ್ರಿಯ HSC ಗಳ ತೆರವುಗೆ ಭಾಗವಹಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇವು ಸಕ್ರಿಯ HSC ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಒಂದಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ವಿಶಿಷ್ಟ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಾಗಿವೆ. ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ IPA ಯ ಸಂಭಾವ್ಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ ಮತ್ತು ಪಾತ್ರಕ್ಕೆ ಮತ್ತೊಂದು ಸಂಭಾವ್ಯ ವಿವರಣೆಯೆಂದರೆ, ಇದು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ಮೈಟೊಫ್ಯಾಜಿ (ಆಂತರಿಕ ಮಾರ್ಗ) ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ TNF ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗ (ಟೇಬಲ್ 1) ಮೂಲಕ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಾವನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾವೆಂಜ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು NF-κB ಬದುಕುಳಿಯುವ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಕ್ಕೆ ನೇರವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 7). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, IPA-ಸಂಬಂಧಿತ ಪುಷ್ಟೀಕರಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳು ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಮಾರ್ಗದಲ್ಲಿ [54] ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಮಾರ್ಗ ಅಥವಾ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಪರ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಸಮರ್ಥವಾಗಿವೆ, ಇದು IPA ಈ ಜೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುವ ಮೂಲಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಮಾರ್ಗ ಅಥವಾ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, HSC ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ IPA ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೇಗೆ ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮಾರ್ಗಗಳು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ.
IPA ಎಂಬುದು ಆಹಾರದ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್‌ನಿಂದ ಕರುಳಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಮೂಲಕ ರೂಪುಗೊಂಡ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ಆಗಿದೆ. ಇದು ಕರುಳಿನ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ಉರಿಯೂತದ, ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಮತ್ತು ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.[55] IPA ಕರುಳಿನ ತಡೆಗೋಡೆ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಅದರ ಸ್ಥಳೀಯ ಶಾರೀರಿಕ ಪರಿಣಾಮಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.[56] ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, IPA ಅನ್ನು ರಕ್ತಪರಿಚಲನೆಯ ಮೂಲಕ ಗುರಿ ಅಂಗಗಳಿಗೆ ಸಾಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು IPA ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್, ಸಿರೊಟೋನಿನ್ ಮತ್ತು ಇಂಡೋಲ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳೊಂದಿಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರಮುಖ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಹಂಚಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ, IPA ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ, ಇದು ಸ್ಪರ್ಧಾತ್ಮಕ ಮೆಟಾಬೊಲಿಕ್ ವಿಧಿಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.[52] IPA ಕಿಣ್ವಗಳು ಅಥವಾ ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಮೇಲೆ ಬಂಧಿಸುವ ತಾಣಗಳಿಗಾಗಿ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್-ಪಡೆದ ಮೆಟಾಬೊಲೈಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪರ್ಧಿಸಬಹುದು, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಮೆಟಾಬೊಲಿಕ್ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಅದರ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ವಿಂಡೋವನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಅದರ ಫಾರ್ಮಾಕೊಕಿನೆಟಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಫಾರ್ಮಾಕೊಡೈನಾಮಿಕ್ಸ್ ಕುರಿತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ಇದು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.[57] ಇದು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ (HSC ಗಳು) ಸಹ ಸಂಭವಿಸಬಹುದೇ ಎಂದು ನೋಡಬೇಕಾಗಿದೆ.
ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನವು ಕೆಲವು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ನಾವು ಒಪ್ಪಿಕೊಳ್ಳುತ್ತೇವೆ. IPA ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಸಂಬಂಧಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು, ನಾವು ಟೈಪ್ 2 ಡಯಾಬಿಟಿಸ್ ಮೆಲ್ಲಿಟಸ್ (T2DM) ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳನ್ನು ಹೊರಗಿಟ್ಟಿದ್ದೇವೆ. ಇದು ಟೈಪ್ 2 ಡಯಾಬಿಟಿಸ್ ಮೆಲ್ಲಿಟಸ್ ಮತ್ತು ಮುಂದುವರಿದ ಯಕೃತ್ತಿನ ಕಾಯಿಲೆ ಇರುವ ರೋಗಿಗಳಿಗೆ ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಗಳ ವಿಶಾಲ ಅನ್ವಯಿಕತೆಯನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಒಪ್ಪಿಕೊಳ್ಳುತ್ತೇವೆ. ಮಾನವ ಸೀರಮ್‌ನಲ್ಲಿ IPA ಯ ಶಾರೀರಿಕ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 1–10 μM [11, 20] ಆಗಿದ್ದರೂ, 1 mM IPA ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅತ್ಯಧಿಕ ವಿಷಕಾರಿಯಲ್ಲದ ಸಾಂದ್ರತೆ [15] ಮತ್ತು ಅತ್ಯಧಿಕ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ದರವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ನೆಕ್ರೋಟಿಕ್ ಕೋಶ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿಲ್ಲ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ IPA ಯ ಸುಪ್ರಾಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದ್ದರೂ, IPA ಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಡೋಸ್ ಬಗ್ಗೆ ಪ್ರಸ್ತುತ ಯಾವುದೇ ಒಮ್ಮತವಿಲ್ಲ [52]. ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿದ್ದರೂ, IPA ಯ ವಿಶಾಲವಾದ ಚಯಾಪಚಯ ಭವಿಷ್ಯವು ಸಂಶೋಧನೆಯ ಸಕ್ರಿಯ ಕ್ಷೇತ್ರವಾಗಿ ಉಳಿದಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಸೀರಮ್ IPA ಮಟ್ಟಗಳು ಮತ್ತು ಯಕೃತ್ತಿನ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳ DNA ಮೆತಿಲೀಕರಣದ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧದ ಕುರಿತು ನಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆಗಳನ್ನು ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಕಾಂಡಕೋಶಗಳಿಂದ (HSCs) ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ ಯಕೃತ್ತಿನ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಂದಲೂ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ನಾವು ಮಾನವ LX-2 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ, ಅದು IPA ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ಸ್ಟೆಮ್ ಸೆಲ್ (HSC) ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ [15], ಮತ್ತು HSCಗಳು ಯಕೃತ್ತಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನ ಪ್ರಗತಿಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರಮುಖ ಕೋಶಗಳಾಗಿವೆ. ಯಕೃತ್ತು ಬಹು ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು DNA ವಿಘಟನೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಹೆಪಟೊಸೈಟ್-HSC-ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಹಾಗೂ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಂತಹ ಇತರ ಕೋಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು IPA ಪಾತ್ರ ಮತ್ತು ಇತರ ಯಕೃತ್ತಿನ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳೊಂದಿಗೆ ಅದರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು.